[发明专利]基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法

权利要求书

1.一种基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂，其特征在于：所述检测试剂由发光底物液A、发光底物液B、包被板、酶结合物、浓缩洗涤液、校准品和质控品组成；

其中，所述包被板上包被有降钙素原纳米抗体，所述酶结合物中包含酶标记的降钙素原纳米抗体；

所述降钙素原纳米抗体具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的VHH链；

其中所述包被板经下述步骤制备而成：

(1)将5.8g十二水磷酸氢二钠和0.59g二水磷酸二氢钠混合后溶解在1L纯化水中，搅拌均匀得到包被缓冲液；

(2)向所得包被缓冲液中加入降钙素原纳米抗体1ml，混匀后按每孔100μl加入到空白包被板中，4℃静置过夜；

(3)倾倒出包被板中的液体，用纯化水洗板1次，按每孔150μl加入酪蛋白封闭液，室温放置2小时，然后倒出酪蛋白封闭液，室温晾干后即得；

其中所述发光底物液A和发光底物液B分别经下述步骤制备而成：

(1)将5.8g十二水磷酸氢二钠、0.59g二水磷酸二氢钠、8.5g氯化钠、0.1g鲁米诺、3g对碘苯酚、0.5ml防腐剂Proclin300混合后溶解在1L纯化水中，搅拌均匀即得到发光底物液A；

(2)将5.8g十二水磷酸氢二钠、0.59g二水磷酸二氢钠、8.5g氯化钠、0.1g过氧化氢脲、0.5ml防腐剂Proclin300混合后溶解在1L纯化水中，搅拌均匀即得到发光底物液B。

2.如权利要求1所述的基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂，其中所述酶结合物经下述步骤制备而成：将6.057g三羟甲基氨基甲烷、10g酪蛋白钠、3.35ml浓度为37.5％的盐酸、0.5ml防腐剂Proclin300、100ml新生牛血清、1ml酶标记的降钙素原纳米抗体混合后溶解在500ml纯化水中，充分搅拌均匀后用纯化水定容至1L，即得到酶结合物。

3.如权利要求1所述的基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂，其中所述酶标记的降钙素原纳米抗体为辣根过氧化物酶标记的降钙素原纳米抗体。

4.如权利要求1所述的基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂，其中所述浓缩洗涤液为含有吐温-20的磷酸盐缓冲液。

5.如权利要求1所述的基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂，其中所述校准品和质控品均为含有降钙素原的磷酸盐缓冲液。

6.如权利要求1-5任一项所述的基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂在制备降钙素原检测试剂盒中的用途。

7.如权利要求1所述的基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)用纯化水将所述浓缩洗涤液稀释20倍，配制成工作浓度洗涤液，备用；

(2)取预先包被有降钙素原纳米抗体的包被板，在其上布设质控品孔1个、校准品孔6个，以及待检血液样品孔多个；

(3)将质控品、校准品、待检血液样品各50μl分别加入到对应的孔中；

(4)然后向每个孔中分别加入所述酶结合物50μl，将包被板用封板膜封好，在42-47℃条件下振荡温育10分钟；

(5)用上述工作浓度洗涤液洗板5次，然后向各个孔中加入至少350μl的工作浓度洗涤液，静置30-60秒后倒出工作浓度洗涤液，室温晾干；

(6)向各个孔中加入所述发光底物液A 50μl和发光底物液B 50μl，振荡混合均匀，室温避光放置5-10分钟，用化学发光免疫分析仪测量每孔的RLU值，即得到结果。

8.如权利要求7所述的检测方法，其中第(4)步骤中振荡温育的温度条件为45℃。