[发明专利]衢枳壳HPLC指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及应用

说明书

本发明提供了一种衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，及由此方法得到的标准指纹图谱，以及在衢枳壳质量控制中的应用；用本发明方法建立的HPLC指纹图谱，能有效地表征衢枳壳药材的质量，有利于全面监控药材的质量；本发明综合运用了指纹图谱的共有峰比较、聚类分析和特有峰分析等方法对衢枳壳及其混淆品进行鉴别，实现对衢枳壳药材及其常见混淆品的鉴别，并能对常用混淆品进行归类，为衢枳壳药材的质量控制、临床正确使用提供依据；本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点，可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

(一)技术领域

本发明涉及中药药材的质量控制方法，具体涉及衢枳壳药材HPLC(高效液相色谱法)指纹图谱的构建方法，由此方法得到的标准指纹图谱，以及在衢枳壳质量控制中的应用。

(二)背景技术

“衢枳壳”又称胡柚片，为芸香科柑橘属植物。1991年张韵冰先生依据其植物学特性将其正式命名，植物学拉丁名为Citrus changshan-huyou Y.B.Chang，使之成为中国柑桔属植物的一个新种，浙江衢州地区为主要产区。七月果皮尚绿的胡柚青果被作为枳壳在民间使用由来已久，通过以往对胡柚的化学成分和药理药效的研究并与《中国药典》中“枳壳”进行比较，发现两者药理作用基本一致。2015版《浙江省中药炮制规范》将常山胡柚青果收录其中，正式命名为“衢枳壳”。

以往对胡柚研究和新资源利用报道大多集中在成熟胡柚果实及胡柚皮、胡柚花等食品和保健品的开发利用上，对胡柚青果化学成分及其药用价值的研究较少，对其质量评价的研究更少之又少。综上，本发明选择产地明确的衢枳壳为主要研究对象，通过液相色谱技术建立衢枳壳的指纹图谱，通过相似度比较及聚类分析，从整体性角度出发，综合评价衢枳壳的药材质量，为衢枳壳的质量控制提供科学依据。

(三)发明内容

本发明旨在提供一种衢枳壳药材HPLC指纹图谱的构建方法，由此方法得到的标准指纹图谱，以及在衢枳壳质量控制中的应用。

本发明的技术方案如下：

一种衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，所述方法包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备

称取衢枳壳供试品，按料液比1：50～100(优选1：75，w/v，g/mL)加入体积分数50％甲醇水溶液中，超声(30～70KHz，功率200～500w)处理10～30min，冷却至室温(20～30℃)，离心(10000～20000rpm)，取上清液，过滤，所得滤液即为供试品溶液；

所述衢枳壳供试品为衢枳壳药材或衢枳壳饮片粉末，均可在市面上通过常规途径商购获得；

所述过滤采用0.45μm的尼龙微孔滤膜；

(2)色谱分析

精密吸取步骤(1)所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪，检测得到供试品的指纹图谱；

所述色谱分析条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相由乙腈和体积分数0.1％～0.3％甲酸水溶液组成，采用梯度洗脱，紫外检测波长为330～360nm；

优选的，所述色谱分析条件为：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相由乙腈和体积分数0.1％～0.3％甲酸水溶液组成，采用梯度洗脱，柱温25～40℃，紫外检测波长320～350nm，流速1.0ml/min，分析时间60～70min，进样量5～10μL；

更加优选的，所述色谱分析条件为：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相由乙腈和体积分数0.1％甲酸水溶液组成，采用梯度洗脱，洗脱程序如表1所示，柱温30℃，紫外检测波长330nm，流速1.0ml/min，分析时间70min，进样量5～10μL；

表1