[发明专利]衢枳壳HPLC指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及应用

权利要求书

1.一种衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备

称取衢枳壳供试品，按料液比1：50～100加入体积分数50％甲醇水溶液中，超声处理10～30min，冷却至室温，离心，取上清液，过滤，所得滤液即为供试品溶液；

(2)色谱分析

精密吸取步骤(1)所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪，检测得到供试品的指纹图谱；

所述色谱分析条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相由乙腈和体积分数0.1％～0.3％甲酸水溶液组成，采用梯度洗脱，紫外检测波长为330～360nm。

2.如权利要求1所述的衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述衢枳壳供试品为衢枳壳药材或衢枳壳饮片粉末。

3.如权利要求1所述的衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述过滤采用0.45μm的尼龙微孔滤膜；

4.如权利要求1所述的衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述色谱分析条件为：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相由乙腈和体积分数0.1％～0.3％甲酸水溶液组成，采用梯度洗脱，柱温25～40℃，紫外检测波长320～350nm，流速1.0ml/min，分析时间60～70min，进样量5～10μL。

5.如权利要求1所述的衢枳壳HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述色谱分析条件为：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相由乙腈和体积分数0.1％甲酸水溶液组成，采用梯度洗脱，洗脱程序如表1所示：

表1

柱温30℃，紫外检测波长330nm，流速1.0ml/min，分析时间70min，进样量5～10μL。

6.衢枳壳标准指纹图谱，其特征在于，所述衢枳壳标准指纹图谱按如下方法获取：

将若干个批次的衢枳壳供试品按照权利要求1～5任一项所述的方法操作，得到液相色谱图，导入国家药典委员会提供的中药指纹图谱相似度评价软件，由软件自动生成衢枳壳标准指纹图谱。

7.如权利要求6所述的衢枳壳标准指纹图谱，其特征在于，具有19个共有峰，确定了其中9个峰的化学成分，分别为：

芸香柚皮苷4号峰、柚皮苷5号峰、橙皮苷7号峰、新橙皮苷8号峰、橘皮内酯水合物9号峰、木犀草素10号峰、橘皮内酯13号峰、川陈皮素16号峰、桔皮素18号峰；

以柚皮苷5号峰为参照峰，19个共有峰的保留时间和相对峰面积如表2所示：

表2 标准指纹图谱共有峰保留时间和相对峰面积

8.如权利要求6所述的衢枳壳标准指纹图谱在衢枳壳质量控制或真伪鉴别中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为：

将衢枳壳样品按照权利要求1～5任一项所述的方法操作，获得样品的指纹图谱，以标准指纹图谱作为对照，采用国家药典委员会提供的中药指纹图谱相似度评价软件，以全谱峰匹配模式对样品进行指纹图谱测定及相似度计算，以相似度不低于0.90为标准判断样品是否合格。