[发明专利]对虾肝肠胞虫海藻糖-6-磷酸合成酶及其制备方法在审
| 申请号： | 201810207946.3 | 申请日： | 2018-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN108220266A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 施泓;阮灵伟;王文华;徐洵 | 申请（专利权）人： | 国家海洋局第三海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70 |
| 代理公司： | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 马应森 |
| 地址： | 361005 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 海藻糖 磷酸合成酶 对虾 蛋白 制备 重组原核表达载体 磷酸合成酶基因 重组蛋白表达 大肠杆菌 特异性引物 蛋白纯度 蛋白复性 分离纯化 同源重组 应用提供 质粒构建 包涵体 逆转录 总RNA 扩增 感染 应用 | ||
1.对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶基因克隆后的核苷酸序列，记为ehpTPS。
2.对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶基因ehpTPS的分子类型为cDNA，序列特征：长度为1392bp，类型为核酸，链性为双链，拓扑结构为线性，所述对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶基因ehpTPS的序列如下所示，记为SEQ ID No.1：
3.对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶基因的核苷酸序列采用以下方法获得：首先提取感染对虾肝肠胞虫的对虾总RNA，并将RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板，经PCR扩增得到SEQ ID No.1的序列；然后根据核苷酸序列设计引物SEQ ID No.3和SEQ ID No.4，经PCR扩增获得ehpTPS基因核苷酸序列SEQ ID No.1；最后ehpTPS基因相关的核苷酸序列SEQ ID No.1通过软件翻译获得基因编码的多肽SEQ IDNo.2序列，通过原核重组表达ehpTPS基因，纯化ehpTPS基因的表达产物；
所述引物序列SEQ ID No.3：
所述引物序列SEQ ID No.4：
所述对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶ehpTPS的分子类型为蛋白质，序列特征：长度为463aa，类型为氨基酸，所述对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶ehpTPS的序列如下所示，记为SEQID No.2：
4.对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶ehpTPS基因，其特征在于其蛋白具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列的多肽；或将SEQ ID No.2氨基酸序列经过至少一个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有与SEQ ID No.2所示氨基酸序列相似功能的多肽。
5.对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶ehpTPS的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)感染对虾肝肠胞虫的对虾总RNA的提取及cDNA反转录；
2)对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶ehpTPS基因的PCR扩增和序列分析；
3)对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)海藻糖-6-磷酸合成酶的重组表达、纯化和复性。
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