[发明专利]一种精准检测ALDH2基因多态性的试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种ALDH2基因多态性检测试剂盒。本发明所提供的ALDH2基因检测试剂盒能够一次性确定ALDH2基因rs671多态性位点的突变基因型(G>A，G>T，G>C)。为实现此种功能，本发明所述试剂盒运用多重PCR技术与Taqman‑MGB荧光探针标记技术相结合的方法，设计四对特异性引物和四条标记不同荧光染料的特异性探针，其特征在于目的基因能且只能与其中一对引物和一条探针结合，保证检测结果的准确性。本发明所述试剂盒具有特异性强，准确度高，操作简便等优势。待测样本可以选择全血或口腔细胞，临床用于指导硝酸甘油的合理用药，指导健康饮酒预防酒精中毒，并在提示重大疾病方面具有重大意义。

技术领域

本发明涉及生物医学领域的基因多态性检测，具体涉及一种乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性检测试剂盒。

背景技术

乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase，ALDH2)，位于第12号染色体，它的主要多态性是rs671。ALDH2基因包含13个外显子，在外显子12处存在一个单核苷酸多态性位点，该位点鸟嘌呤核苷酸突变为腺嘌呤核苷酸，即G→A，等位基因的突变导致其编码的氨基酸由谷氨酸变为赖氨酸，从而使ALDH2酶的活性降低甚至失活。ALDH2*1/*2和ALDH2*2/*2的脱氢酶活性分别仅为ALDH2*1/*1的13％～14％和2％，rs671位点产生突变的人群硝酸甘油催化效率分别为未发生突变人群的8％～15％和6％～7％。

ALDH2能够将乙醛氧化为乙酸，是酒精在人体内代谢的关键物质。乙醛脱氢酶2的活性降低不仅影响酒精的代谢解毒能力而且会降低硝酸甘油的疗效。硝酸甘油临床作为冠心病、急性心绞痛等的特效药，但是，临床数据显示25％以上的患者服用硝酸甘油无效。据统计，ALDH2*2/*1或ALDH2*2/*2突变普遍存在于亚洲黄种人，其频率分布具有明显的地域性和种族差异，ALDH2*2在中国人群中的频率高达39％，其中，不仅包括G＞A基因型突变，而且还包括G＞T和G＞C基因型突变。

目前，ALDH2基因多态性的检测方法主要有DNA微阵列芯片法、PCR毛细电泳片段分析法、PCR-PFLP、微测序等。上述方法都需要提取待检样本中的DNA，部分方法学需要借助凝胶电泳等分析结果，操作过程复杂，检测周期长。在检测过程中仅可检测等位基因G突变为A的情况，对于G突变为T和C的样本易造成假阴性或假阳性，导致错误的诊断结果。本发明所述ALDH2基因多态性检测试剂盒，采用多重PCR与Taqman-MGB探针结合的方法，设计多对PCR引物和荧光探针，有效解决由于G突变为T或C导致PCR扩增失败，结果误判的情况，提高检测准确度。本发明所述试剂盒检测样本为外周全血或唾液，采用在PCR反应液中加入BSA、Triton X-100以及明胶等辅料，省去提取DNA这一操作，简化操作步骤节省大量时间，PCR扩增结束即可获得检测结果。

发明内容

本发明的目的在于提供用一种精准检测ALDH2基因多态性的试剂盒，为临床合理使用硝酸甘油(NTG)、健康饮酒提供指导。

本发明所述ALDH2基因检测试剂盒将多重PCR技术与Taqman-MGB荧光探针技术相结合，具有操作简便、特异性强、灵敏度高等优点。

进一步，所述ALDH2基因共用上游引物具有SEQ NO.1碱基序列，共用下游引物具有SEQ NO.2所述碱基序列。Taqman-MGB荧光探针分别具有SEQ NO.3～6碱基序列。

表1引物序列表

S1：以待测标本中的DNA为模板，利用SEQ NO.1～6所述PCR引物和Taqman-MGB荧光探针进行多重PCR扩增。

S2：分析PCR扩增结果图，Ct值≥36该基因无扩增，Ct值＜36则该基因有扩增，据此确定SNP位点的基因型。