[发明专利]一种精准检测ALDH2基因多态性的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测ALDH2基因rs671位点多态性的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液、一对共用上下游引物和四条探针SEQ NO.1～6。

2.根据权利要求书1所述试剂盒，其特征在于探针SEQ NO.3～NO.6的荧光标记基团为：

SEQ NO.3的5’端标记FAM基团，3’端标记BHQ-1基团；

SEQ NO.4的5’端标记VIC基团，3’端标记BHQ-1基团；

SEQ NO.5的5’端标记TEXAS RED基团，3’端标记BHQ-2基团；

SEQ NO.6的5’端标记Cy5基团，3’端标记BHQ-3基团。

3.根据权利要求书1所述的试剂盒，其特征在于：

检测ALDH2基因的野生型引物能够与野生型样本模板特异性结合，并且能够与SEQNO.3探针特异性结合；

突变型(G＞A)引物能够与G突变为A的样本模板特异性结合，并且能够与SEQ NO.4探针特异性结合；

突变型(G＞T)引物能够与G突变为T的样本模板特异性结合，并且能够与SEQ NO.5探针特异性结合；

突变型(G＞C)引物能够与G突变为C的样本模板特异性结合，并且能够与SEQ NO.6探针特异性结合。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液pH值为7.5～8.5，由1～5U的热启动Taq酶、2～10mmol/L的dNTPs、20～100mmol/L的Tris-HCl、5～20mmol/L的MgCl2、0.1～1mg/mL的BSA、0.1％～2％的明胶、0.2％～2％的Triton X-100和0.1～0.5mmol/L的KCl组成。

5.一种检测ALDH2基因rs671多态性位点基因型的试剂盒，其特征在于包括如下步骤：

(1)获取目的基因序列；

(2)设计PCR引物，所述引物包括一对能够与野生型和突变型模板结合的共用上下游引物；

(3)设计4条特异性Taqman-MGB荧光探针，能够分别与野生型模板和突变型(G＞A，G＞T，G＞C)模板结合，所述荧光探针5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，四条荧光探针分别标记不同的荧光染料，且相互间无干扰；

(4)以待测样本为模板，利用步骤(2)和步骤(3)所设计的引物和探针进行多重PCR扩增；

(5)根据步骤(4)PCR扩增曲线的Ct值确定出ALDH2基因rs671位点的基因型。

6.根据权利要求书5所述试剂盒，其特征在于，上下游引物的混合比例为1∶1，四条特异性荧光探针混合比例为1∶1∶1∶1，且引物终浓度为0.20μM。

7.根据权利要求书5所述多重PCR扩增条件为：98℃预变性5min；98℃变性25s，55℃退火40s，72℃延伸30s(荧光采集)，循环45次，72℃最终延伸3min。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述Ct值为36。

9.一种检测ALDH2基因rs671多态性位点基因型的试剂盒，待测样本为EDTA抗凝外周全血或口腔细胞。