[发明专利]一种从人外周血CTC中检测EML4-ALK融合基因亚型荧光定量PCR方法在审
| 申请号： | 201810207060.9 | 申请日： | 2018-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN109136343A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 赵刚 | 申请（专利权）人： | 江苏苏博生物医学股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6851;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 223800 江苏省宿*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 亚型 荧光定量PCR 人外周血 检测 亚型特异性引物 阳性质粒标准品 医疗费用负担 肿瘤细胞检测 个体化治疗 酪氨酸激酶 抑制剂治疗 合理用药 检测结果 经济损失 临床用药 社会医疗 时效损失 荧光信号 治疗效果 差减法 富集 可用 水解 搜集 预测 | ||
1.一种从人外周血CTC中检测EML4-ALK融合基因亚型荧光定量PCR方法，其特征在于包括：
1）采用差减法从人外周血中富集CTC；
2）设计并获得EML4-ALK融合基因亚型特异性引物和特异性Taqman探针；
3）以EML4-ALK融合基因亚型阳性质粒标准品为模板进行PCR扩增，并在PCR过程中搜索Taqman探针水解产生的特异荧光信号，来检测EML4-ALK融合基因亚型的表达；
所述EML4-ALK融合基因亚型包括1、2、3a、3b、4、5a、5b、6、7；
所述EML4-ALK融合基因亚型特异性Taqman探针5’端标记FAM荧光基团，3’端标记TAMRA荧光基团；
所述EML4-ALK融合基因亚型1、2、3a、3b、4、5a、5b、6、7对应的Taqman探针依次为序列表中1至9。
2.根据权利要求1所述的从人外周血CTC中检测EML4-ALK融合基因亚型荧光定量PCR方法，其特征在于：
所述EML4-ALK融合基因亚型1特异性上下游引物依次为序列表中10、11；
所述EML4-ALK融合基因亚型2特异性上下游引物依次为序列表中12、13；
所述EML4-ALK融合基因亚型3a特异性上下游引物依次为序列表中14、15；
所述EML4-ALK融合基因亚型3b特异性上下游引物依次为序列表中16、17；
所述EML4-ALK融合基因亚型4特异性上下游引物依次为序列表中18、19；
所述EML4-ALK融合基因亚型5a特异性上下游引物依次为序列表中20、21；
所述EML4-ALK融合基因亚型5b特异性上下游引物依次为序列表中22、23；
所述EML4-ALK融合基因亚型6特异性上下游引物依次为序列表中24、25；
所述EML4-ALK融合基因亚型7特异性上下游引物依次为序列表中26、27。
3.根据权利要求1所述的从人外周血CTC中检测EML4-ALK融合基因亚型荧光定量PCR方法，其特征在于：
所述EML4-ALK融合基因亚型1、2、3a、3b、4、5a、5b、6、7阳性质粒标准品序列依次为序列表中序列28至36。
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