[发明专利]一种rhTNK-tPA细胞收获液的纯化方法有效
| 申请号： | 201810206059.4 | 申请日： | 2018-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN108424897B | 公开（公告）日： | 2020-08-14 |
| 发明（设计）人： | 吴宜南;董珣;钟勤;陈军区;叶才文 | 申请（专利权）人： | 广州铭康生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48 |
| 代理公司： | 广州科沃园专利代理有限公司 44416 | 代理人： | 张帅 |
| 地址： | 510530 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 rhtnk tpa 细胞 收获 纯化 方法 | ||
1.一种rhTNK-tPA细胞收获液的纯化方法，其特征在于，将所述rhTNK-tPA细胞收获液在进行柱层析前先进行深层过滤和除菌过滤；
所述柱层析还包括以下步骤：
A)将过滤后的rhTNK-tPA细胞收获液经Blue Sepharose 6FastFlow亲和柱层析后，用洗脱液Ⅰ洗脱后得到含目标蛋白的洗脱液；
B)将经A)步骤处理得到的含目标蛋白的洗脱液进行Lysine HyperD亲和柱层析，用洗脱液Ⅱ洗脱；
C)将上述含目标蛋白的洗脱液进行Sephadex G-25凝胶过滤，经洗脱液Ⅲ洗脱后，即得纯化后的rhTNK-tPA；所述洗脱液Ⅰ由以下浓度的组分组成：20mM磷酸盐缓冲液、1M氯化钠溶液、2M尿素和0.04％吐温80，洗脱液的pH值为7.0，用量为3.0倍体积；所述洗脱液Ⅱ由以下浓度的组分组成：20mM磷酸盐缓冲液、0.1M 6-氨基正己酸、0.2M精氨酸和0.04％吐温80，洗脱液的pH值为7.0，用量为2.0倍体积；所述洗脱液Ⅲ由以下浓度的组分组成：0.2M精氨酸和0.04％吐温80，洗脱液的pH值为7.2，用量为1.5倍体积；
所述步骤B)和步骤C)调换顺序；所述纯化后的rhTNK-tPA纯度为99.3％，回收率为96.5％，比活性为625000IU/mg。
2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述除菌过滤采用的是0.2μm的除菌过滤器。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广州铭康生物工程有限公司，未经广州铭康生物工程有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810206059.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
