[发明专利]一种检测生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法

说明书

一种检测生物样品中氨含量的衍生化气相色谱‑质谱方法，该方法包括如下步骤：（1）检测条件；（2）样品处理；（3）图谱分析；(4)标准血氨样品的制备；（5）含量计算。本方法通过柱前衍生化气相色谱‑质谱联用法，能够有针对性的检测出生物样品中的氨含量，是临床检验血氨光谱法的补充，可以有效降低检血凝固状况和溶血对检测结果的影响。提高了检测的灵敏度，同时大大简化了检测步骤，节省了时间和成本。

技术领域

本发明属于生物材料检测领域，具体涉及一种检测生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法。

背景技术

以血氨(Blood ammonia，BAN)为代表的生物样品中的氨是非蛋白氮重要的化学表现形式。血氨的来源包括内源性：体内代谢产生的氨称为内源性氨，主要来自氨基酸的脱氨基作用；部分来自肾小管上皮细胞中谷氨酰胺分解产生的氨；胺类的分解也可产生氨；服用胺类药物。外源性：由消化道吸收人体内的氨称为外源性氨，如肠道内未被消化的蛋白质和未被吸收的氨基酸，经肠道细菌作用产生的氨；血中尿素扩散到肠道，经细菌尿素酶作用水解生成的氨。

氨是有毒物质，人体内的氨通过以下途径解毒:①肝内经鸟氨酸循环合成尿素，经肾脏排出体外；②转变为氨基酸上的氨基；③在肾脏泌氨中与肾小管腔中的H⁺形成铵盐，随尿排出体外。肝脏将氨合成尿素，是保证血氨正常的关键。当肝脏功能严重损伤时，氨不能被解毒，在中枢神经系统聚集，会引起肝性脑病。

现在普遍采用的临床检验血氨的方法为酶法。利用酶反应中NH₄⁺与NADPH的等摩尔消耗关系。用分光光度计波长340nm，监测吸光度下降速率，即NADPH消耗速率，与标准管比较，可计算出血浆氨含量。这是一种间接的测定方法，且受到光谱测定法固有局限性的干扰。在溶血的情况下，不能准确测定。同时血浆中LDH、AST等也能利用NADPH，影响血浆氨测定结果的准确性。干扰因素较多。

血氨和尿氨是临床评价非蛋白氮的重要指标之一。人的血氨浓度的正常值范围比尿素氮(尿素)低的多，为18-72μmol/L。换算成法医毒物分析常用质量单位为306-1224ng/ml，上限即约为1.22μg/ml。肝昏迷患者的血氨值会大幅度突破上限。申请人在严重肝病死者的血中检出了20μg/ml以上的氨。

因此，研制开发一种可快速准确的检测生物样品中氨的方法一直是亟待解决的新课题。

发明内容

本发明提供一种准确的检测生物样品中氨的方法，通过柱前衍生化气相色谱-质谱联用法，能够有针对性的检测出生物样品中的氨含量，而不是间接的检测，可排除许多外界因素的干扰，提高了检测的灵敏度，同时大大简化了检测步骤，节省了时间和成本。

本发明的目的是这样实现的：一种检测生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法，该方法包括如下步骤：

(1)检测条件：

气质联用仪：采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)；

色谱柱：HP-5ms毛细管柱，规格：30m×0.25mm，0.25μm；

电子离子轰击源(EI源，70eV)，全离子扫描，扫描质量范围为40amu～600amu；

载气为高纯氦气(99.9％)，流速1.0ml/min；

升温程序：初始柱温为60℃，保持1min，以15℃/min升温至180℃,保持8min，再以30℃/min升温至260℃,进样口温度为265℃，离子源温度为230℃；

(2)样品处理：