[发明专利]一种检测生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法

权利要求书

1.一种检测生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

检测条件：

气质联用仪：采用气相色谱-质谱联用仪；

色谱柱：HP-5ms毛细管柱，规格：30 m×0.25 mm，0.25 μm；

电子离子轰击源，70 eV，全离子扫描，扫描质量范围为40 amu～600 amu；

载气为高纯氦气，纯度为99.9%，流速1.0 ml/min；

升温程序：初始柱温为60 ℃，保持1 min，以15 ℃/min升温至180℃，保持8 min，再以30 ℃/min升温至260 ℃，进样口温度为265 ℃，离子源温度为230 ℃；

（2）样品处理：

精密称取生物样品0.5 g于10 ml规格的试管内，加入pH=14浓度为1M NaOH溶液0.5ml，加入七氟丁酰氯衍生化试剂10 µl，漩涡震荡30s后，微波1min，加入乙酸乙酯2.0 ml震荡1 min，3500转离心10 min，用移液器取出1.5 ml具刻度尖底小瓶内，用氮气吹至0.1 ml体积后进样GC-MS检测分析；

(3) 图谱分析：

衍生化产物七氟丁酰胺，保留时间3.25 min，特征质量数为m/z 214、m/z 166、m/z194、m/z 146 、m/z 100、 m/z 69 和m/z 44，其中m/z 214为分子离子峰，m/z 44为基峰；

（4）标准血氨样品的制备：

稀释标准氨溶液浓度500 µg/ml，用去氨蒸馏水定容于100 ml规格容量瓶中，分别向0.5ml正常人新鲜静脉血中添加不同浓度的氨标准液，制作成质量浓度分别为1、10、50、100和200 µg/ml的标准工作曲线样品溶液；

（5）含量计算：

将步骤（4）中制成的标准工作曲线样品溶液按照步骤（2）中样品处理的方法进行处理后进样分析，选择检测m/z166的选择离子色谱图，以衍生化产物七氟丁酰胺的峰面积为纵坐标，以血中添加氨的质量浓度为横坐标，计算回归方程得到 y = 82 815x + 63 766，R²=0.9 877，计算含量时，将待测样品中七氟丁酰胺的峰面积代入回归方程即得到待测样品含量。

2.根据权利要求1所述的一种生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法，其特征在于：所述的生物样本为尿液、胃内容物或血浆样品。

3.根据权利要求1所述的一种生物样品中氨含量的衍生化气相色谱-质谱方法，其特征在于：该方法的最低检出限以S/N=3进行计算，对于血氨的最低检出限为0.2 µg/ml，定量限为1.0 µg/ml。