[发明专利]一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法在审
| 申请号： | 201810195150.0 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108251491A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 秦和平;张和平;钟义华;祝国祥;刘良伏 | 申请（专利权）人： | 中山百灵生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P33/02 | 分类号： | C12P33/02 |
| 代理公司： | 中山市兴华粤专利代理有限公司 44345 | 代理人： | 吴剑锋 |
| 地址： | 528400 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 熊去氧胆酸 鹅去氧胆酸 类固醇脱氢酶 基石胆酸 合成 酶促法 苹果酸脱氢酶 磷酸缓冲液 原料利用率 催化还原 催化氧化 反应条件 起始原料 有机溶剂 苹果酸 底物 氧气 溶解 | ||
1.一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于包括如下步骤：
A、将鹅去氧胆酸放入反应容器中，加入磷酸缓冲液溶解，调节溶液pH值，加入NAD、NOX2、7-α类固醇脱氢酶，通入氧气、控制反应温度和反应pH值，反应直到鹅去氧胆酸在溶液中的残留量低于1％，反应完成后升温搅拌，然后降温至常温；
B、反应液中加入L-苹果酸钠、苹果酸脱氢酶、7-β类固醇脱氢酶，控制反应温度和反应pH值，反应直到7-酮基石胆酸残留低于0.1％，反应完成后，加碱升温搅拌，然后降温至常温，过滤除去溶液中的固形物，滤液加酸结晶得到UDCA。
2.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤A中所述的磷酸缓冲液浓度为50-100mM。
3.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤A中所述的溶液pH值为7.5-8.5。
4.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤A中所述的NAD用量为鹅去氧胆酸重量的0.10-0.30％；所述的NOX2用量为鹅去氧胆酸重量的1.0-3.0％；所述的7-α类固醇脱氢酶用量为鹅去氧胆酸重量的0.30-0.50％。
5.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤A中氧气的流速为20-100ml/L/min，反应温度为常温，反应pH值为7.5-8.0。
6.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤A中所述的反应后温度上升至40-80℃；搅拌时间控制在20-60分钟。
7.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤B中所述的L-苹果酸钠用量为鹅去氧胆酸重量的40-70％；所述的苹果酸脱氢酶用量为鹅去氧胆酸重量的1.0-3.0％；所述的7-β类固醇脱氢酶用量为鹅去氧胆酸重量的0.1-0.3％。
8.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤B中反应温度为25-30℃，反应pH为7.0-7.5。
9.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤B中反应后升温至60-80℃，搅拌时间控制在1-3小时。
10.根据权利要求1所述的一种酶促法合成熊去氧胆酸的方法，其特征在于步骤B中所述的结晶所用的酸为无机酸，结晶pH为2-3。
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