[发明专利]一种分析辣木亲缘关系的反应体系、试剂盒及其应用方法有效

申请号：	201810189666.4	申请日：	2018-03-08
公开（公告）号：	CN108456719B	公开（公告）日：	2022-03-29
发明（设计）人：	林艺华;林宗铿;郑涛;蔡坤秀	申请（专利权）人：	福建省热带作物科学研究所
主分类号：	C12Q1/6858	分类号：	C12Q1/6858;C12Q1/6895;C12N15/11
代理公司：	厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204	代理人：	李雁翔;游学明
地址：	363000 福***	国省代码：	福建;35
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摘要：
搜索关键词：	一种分析亲缘关系反应体系试剂盒及其应用方法
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【权利要求书】：

1.一种分析辣木亲缘关系的SRAP分子标记引物组合，其特征在于：由如下13对引物对组成：

A6：5'-GACTGCGTACGAATTAAT-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG TAG-3'；

F1：5'-GACTGCGTACGAATT GCA-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG ATA-3'；

F2：5'-GACTGCGTACGAATT GCA-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG AGC-3'；

F3：5'-GACTGCGTACGAATT GCA-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG AAT-3'；

G3：5'-GACTGCGTACGAATTATG-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG AAT-3'；

I4：5'-GACTGCGTACGAATT ACG-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG ACC-3'；

L8：5'-GACTGCGTACGAATT GTC-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG TGT-3'；

M2：5'-GACTGCGTACGAATT GGT-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG AGC-3'；

M3：5'-GACTGCGTACGAATT GGT-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG AAT-3'；

P7：5'-GACTGCGTACGAATT CGG-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG TTG-3'

P8：5'-GACTGCGTACGAATT CGG-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG TGT-3'

Q1：5'-GACTGCGTACGAATT CCA-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG ATA-3'

Q2：5'-GACTGCGTACGAATT CCA-3'；5'-TGAGTCCAAACCGG AGC-3'。

2.辣木亲缘关系的分析方法，包括如下步骤：

（1）提取辣木基因组DNA为模板，保存于-20℃备用；

（2）采用PCR反应体系对（1）中的DNA进行扩增；所述反应体系中，每25µl反应液包含，不含Mg²⁺的10*PCR buffer 2.5µl，Mg²⁺ 2mM，dNTPs 0.2mM，DNA 40ng，Taq DNA聚合酶0.625U，上下游引物各0.75µmol；将所述反应液按如下程序进行扩增：94℃预变性5min，94℃变性1min，37℃复性1min，72℃延伸1min，5个循环反应，再94℃变性1min，50℃复性1min，72℃延伸1min，35个循环反应，72℃再延伸10min，4℃保存；其中，采用如下13对上下游引物分别扩增，分别是：