[发明专利]一种从动物体提取肝素钠的方法

说明书

本发明公开了一种从动物体中提取肝素钠的方法，包括以下步骤：(1)盐解；(2)吸附；(3)树脂清洗；(4)脱附；(5)除杂；(6)沉淀；(7)干燥。本发明提供的肝素钠提取方法能减少环境污染，提高肝素钠产量，减少企业投入成本，具有极为广阔的市场前景。

技术领域

本发明涉及肝素钠的提取方法，尤其是涉及一种从动物体中提取肝素钠的方法。

背景技术

肝素广泛存在于在猪、牛、狗等哺乳动物的内脏和肠粘膜中。肝素主要是由D-葡糖胺， L-艾杜糖醛酸，N-乙酰葡萄糖胺及D-葡糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，分子量分布在 6000～20000，为白色或类白色粉末，无毒无味，有吸湿性。肝素易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂，分子结构单元中含有5个硫酸基和2个羟基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子发生反应生成盐。因而肝素通常以钠盐或钙盐的形式存在，称为肝素钠(Heparin Sodium)或肝素钙，在使用中尤以肝素钠为主。肝素钠是肝素以钠盐的形式被提取出来，并制成药用制剂。实际上产生药效的是肝素，肝素具有抗凝血作用，是一种应用已久的抗凝血剂。把肝素制成合适的钠盐能便于他的保存，制剂和使用，使其不至于在一定时期内失去活性和药效。

目前，国内从动物体中提取肝素钠的方法主要有盐解法及酶解法，其中以盐解法应用最为普遍。动物体内的肝素通常是与其它粘多糖及蛋白质结合在一起的，用盐解法使肝素在碱性条件下与纳离子反应生成肝素钠，从而从蛋白质的复合物中分离出来，并用强碱性阴离子交换树脂从解离液中对肝素负离子进行吸附，再用盐水将吸附在树脂上的肝素负离子洗脱下来，最后进行过干燥，获得成品。

盐解法从哺乳动物小肠粘膜中提取肝素钠的工艺虽简单稳定，但在盐解过程中有部分肝素阴离子并未与钠离子结合形成肝素钠，使得获得的粗品肝素钠收率较低；最后得到的肝素钠中蛋白质残留量较高，对肝素钠的生物活性影响很大，一般会损失5-7％的肝素钠活性，使得质量难以控制和稳定。

发明内容

本发明提供了一种从动物体中提取肝素钠的方法，以解决现有技术从哺乳动物的小肠粘膜中提取肝素钠时，最终得到的肝素钠效价低的问题。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案概述如下：

一种从动物体中提取肝素钠的方法，包括以下步骤：

(1)盐解：将用于提取肝素钠新鲜小肠粘膜绞碎，按水与绞碎的小肠粘膜重量比为5.5:1的配比向绞碎的小肠粘膜中加入水混合均匀，并加入盐或盐水调节盐度为6.2度，再加入NaOH溶液调节pH至9.5-9.7，先升温至50-55℃，保温2h，而后升温至92-95℃，保温10-12min，捞出残渣并收集作为饲料，剩下混合液；

(2)吸附：用130-150目双层纱布过滤步骤(1)中所述的混合液，并将得到的滤渣按步骤(1)进行二次提取，将两次所得滤液进行合并在一起，并加入清水调节盐度2.6-2.8度，调节pH为8.3-8.7，控制温度为55-58℃，加入预处理好的树脂，进行搅拌吸附，搅拌时间为5-7h，其中所用树脂为德国肝素钠树脂WD-1701，使用重量比为树脂：小肠为 1-1.2:60；

(3)树脂清洗：将步骤(2)所述的经树脂吸附后的溶液收集起来，作为下次步骤(1)中代替溶解小肠粘膜水，收集步骤(2)所述用于吸附后的树脂，并用自来水清洗至无粘膜杂质为止；

(4)脱附：将步骤(3)所述的清洗后的树脂按1:1的配比浸入盐度为24-25度的盐水中，并控制温度在45-50℃，搅拌3-4h后收集一次洗脱液，并调节一次洗脱液盐度为19-21度；将一次洗脱后的树脂按1:1的配比浸入18.5-19度的盐水中，温度控制在45-50℃，搅拌3-4h收集二次洗脱液，调节二次洗脱液盐度为19-21度；