[发明专利]一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下具体制备步骤：

一、肾脏ECM的制备：

步骤一：肾脏初步处理：取动物肾脏，保留肾蒂结构，并且进行肾动脉置管，然后予以500ml双蒸水快速灌注冲洗2h，以去除肾脏血管中残留的血液成分；

步骤二：肾脏脱细胞灌注：当冲洗结束后，利用1000ml的Triton X-100快速灌注4h后，再用1000ml的Triton X-100持续缓慢灌注12h，当Triton X-100灌注完成后，利用50 U/mlType I DNase I液快速灌注4h；

步骤三：肾脏冲洗：当漂洗结束后，用双蒸水灌注冲洗2h，去除肾脏内残余Triton X-100和Type I DNase I液；

二、肾脏ECM水凝胶的制备：

步骤一：脱水灭菌：当肾脏ECM的制备完成之后，将肾脏在冷冻干燥机中脱去水分，并且剪碎呈粉末状，同时导入环氧乙烷气体进行灭菌；

步骤二：搅拌消化：将粉末状的肾脏ECM溶于含胃蛋白酶的0.1M盐酸中，并且在室温条件下搅拌消化；

步骤三：成胶：当步骤二完成之后，向内加入1/9溶液总体积的灭菌10xPBS，并且利用灭菌1xPBS调整最终ECM水凝胶浓度为15mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：肾脏ECM的制备的步骤一中动物肾脏为新鲜肾脏，且从动物体内取出时间为10min~60min。

3.根据权利要求1所述的一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：肾脏ECM的制备是步骤二中Triton X-100浓度设置为0.5%~1.5%，50 U/ml Type I DNase I液是由10mM Tris-base、2mM MgCl2、2mM CaCl2和150mM NaCl混合而成，且Type I DNase I液pH值呈7.6。

4.根据权利要求1所述的一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：肾脏ECM水凝胶的制备步骤一中冷冻干燥机温度保持在-30℃~-50℃之间。

5.根据权利要求1所述的一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：肾脏ECM水凝胶的制备步骤二中搅拌消化时间设置为48h，并且消化结束后，加入1M的NaOH调整溶液的pH值至7.4。

6.根据权利要求1所述的一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：肾脏ECM水凝胶的制备步骤三进行时，需始终保持在冰上进行。

7.根据权利要求1所述的一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：肾脏ECM的制备和肾脏ECM水凝胶的制备在进行时，整个流程都需要在超净台中完成，而且加入的溶液必须经过灭菌或细菌过滤器过滤。