[发明专利]一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法

说明书

一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法，涉及共振拉曼检测。1)配制茚三酮试液；丙氨酸标准品的衍生化处理；标准曲线的绘制；中药液稀配液的拉曼检测；丙氨酸标准品拉曼光谱标准曲线的验证；将中药液稀配液的衍生液进行紫外可见光谱的测定，通过标准曲线测得其浓度，验证拉曼检测结果的准确性。无需对中药液进行预处理，直接对衍生化溶液进行共振拉曼的测试，即可实现对中药液中的氨基酸总量的定性以及定量分析。与现有技术相比，极大地简化了前处理的操作步骤，便可简单、快速、可靠地实现中药液中氨基酸总量的定性和定量分析。

技术领域

本发明涉及共振拉曼检测，尤其是涉及一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法。

背景技术

氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的统称，是构成生物体蛋白质并同生命过程有关的最基本的物质，与生物的生命活动有着密切的关系。既是蛋白质的基本组成单位,又是合成核酸的重要氮源并且提供能量([1]林太凤，赵梦柯，王妍鸣等.氨基酸检测技术研究进展[J].安徽农业科学，2015(18):16-19)。同时,氨基酸不仅是人体需要的一种营养成分,而且通过与细胞内各种生物分子的相互作用调控着各种生理病理过程,在一些疾病的发生和发展中扮演着至关重要的角色([2]邢健，李巧玲，耿涛华.氨基酸分析方法的研究进展[J].中国食品添加剂，2012(5):187-191)，并对临床疾病研究有一定的帮助。由于氨基酸在人体内起重要作用，氨基酸分析技术一直是现代临床医学、生物化学及食品饲料等领域必不可少的研究手段([3]刘雨，张英.氨基酸分析技术在纺织品检测中的应用[J].丝绸，2017(54):20-27)作为一类外科常用药，中药液在临床上因其产品富含丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸等多种氨基酸被广泛应用于烧伤、烫伤等，使用方便，疗效较好，因此，氨基酸总量是评估产品质量的主要指标之一。很多中药液在对原料进行提取时需对总氨基酸含量进行质量控制，而常常以丙氨酸含量比重最大，故以丙氨酸作为氨基酸总量的评估标准。

目前，氨基酸检测的研究方法有很多种，包括分光光度法、气相色谱法、液相色谱法等。高效液相色谱法应该是目前应用最为广泛的检测方法，但是存在明显的局限性，比如样品前处理要求高、操作繁杂、检测周期长等，这就需要研究一种样品前处理简单，快速方便，结果可靠的检测方法。

和红外光谱一样，拉曼光谱属于分子振动光谱，具有测试时间短、灵敏度高、操作简单、无需预处理等优点，可进行现场快速筛查、检测及鉴别。当激发光的频率接近或等于某电子激发态的激发频率时，某些拉曼线的强度会急剧增大，称为共振拉曼效应。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术中存有的不足，提供可解决现有技术前处理繁杂、检测时间长等问题的一种快速检测中药液中氨基酸总量的共振拉曼检测方法。

本发明包括以下步骤：

1)配制茚三酮试液；

在步骤1)中，所述配制茚三酮试液的具体方法可为：将0.1g茚三酮溶于50mL的无水乙醇中，得茚三酮质量浓度为0.2％的茚三酮试液。

2)丙氨酸标准品的衍生化处理；

在步骤2)中，所述丙氨酸标准品的衍生化处理的具体方法可为：取等体积的以下不同浓度的丙氨酸标准品：0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/mL，1.2mg/mL，再依次加入等体积的茚三酮试液，混合摇匀，沸水浴加热15～30min，自然冷却，得到丙氨酸标准品衍生液，待测拉曼，所述茚三酮试液可采用0.2％茚三酮试液。

3)标准曲线的绘制；

在步骤3)中，所述标准曲线的绘制的具体方法可为：以丙氨酸标准品浓度为横坐标，660cm^-1的拉曼强度为纵坐标，绘制丙氨酸标准品的拉曼光谱标准曲线。

4)中药液稀配液的拉曼检测；