[发明专利]罗汉果性别基因SgACS2及其扩增方法

说明书

本发明公开了一种罗汉果性别基因SgACS2，雄株系该基因序列如SEQ ID No.1所示，雌株系该基因序列如SEQ ID No.2所示。本发明为罗汉果苗期性别PCR扩增检测提供了方法，同时也为罗汉果基因工程育种和利用特异多态性位点开发苗期性别鉴定新方法提供了重要的基因序列信息基础，从而实现加速罗汉果品种遗传改良进程，节约大量土地、人力和财力的有益效果。

技术领域

本发明涉及植物分子生物学领域。更具体地说，本发明涉及一种罗汉果性别基因SgACS2及其扩增方法。

背景技术

罗汉果(Siraitia grosvenorii)为我国特有的葫芦科药用植物，具有润肺镇咳、润肠通便(中国药典，2010)、抗氧化(戚向阳等，2006)、降血糖(戚向阳等，2003)、抗癌(Takasaki et al，2003)等作用，是卫生部第一批列入既是药品又是食品名录的中药品种，也是广西最著名的道地药材。罗汉果活性成分甜苷V(刘婷等，2007)为世界上最强的非糖甜味物质之一，甜度为蔗糖的300-400倍(Matsumoto et al，1990)，且低热量、无毒(Jin etal，2007；Qin et al，2006)，是适宜糖尿病和肥胖症者食用的天然甜味剂。自成功打入美国市场(Rahul et al，2013)，市场需求量迅速增长。虽然组培苗成功推广应用使产业种植规模迅速扩大，但是苗期性别无法鉴定问题一直严重影响着罗汉果品种遗传改良。罗汉果通常为雌雄异花异株，由于后代群体中雌性株很少(雌、雄性别比为3︰7)，且种植时单株占地面积广、成本高，以致罗汉果杂交育种时，每种植一亩后代群体，雄性株浪费的土地和资金严重。苗期性别鉴定及早剔除无用的雄性株，从而富集雌性株，可大大提高育种效率，加速罗汉果品种遗传改良进程，节约大量土地、人力和财力。

罗汉果性别分化遗传机制未知情况下开发的现有随机多态性DNA标记(陶莉等，2005；秦新民等，2007；韦素玲等，2008；张会新等，2013)和同工酶标记(李惠敏等，2007)为非性别决定基因标记，存在与性别连锁不紧密而标记丢失问题(黄姿梅，2007)，这严重影响其苗期性别鉴定。Solexa等新一代高通量基因测序技术，具有全面、高效(1小时工作量相当于传统测序技术1个月的工作量)、廉价特点，可分析特定时空组织或器官基因的整个转录表达情况，非常便于罗汉果性别分化等基因遗传控制机制分析研究。因此，本发明以芽变两性突变体F56回交后代雄性和雌性近似等位基因系为材料，采用Solexa高通量测序技术(RNA-Seq-DEG)筛选出性别决定基因，通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和聚合酶链式反应技术(PCR)，克隆测序罗汉果性别基因SgACS2，以为罗汉果苗期性别PCR扩增检测提供了方法，同时也为罗汉果基因工程育种和利用特异多态性位点开发苗期性别鉴定新方法提供重要的基因序列信息基础，从而实现加速罗汉果品种遗传改良进程，达到节约大量土地、人力和财力的目的。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种罗汉果性别基因SgACS2及其扩增方法，其雄株系该基因序列如SEQ ID No.1所示，雌株系该基因序列如SEQ ID No.2所示，提取罗汉果基因进行扩增实验得出罗汉果雌雄株的性别基因SgACS2的不同碱基序列，有利于寻找差异多态性位点位置，为罗汉果苗期性别PCR扩增检测提供了方法，同时也为罗汉果基因工程育种和利用特异多态性位点开发苗期性别鉴定新方法提供重要的基因序列信息基础，从而实现加速罗汉果品种遗传改良进程，达到节约大量土地、人力和财力目的。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种罗汉果性别基因SgACS2，雄株系该基因序列如SEQ ID No.1所示，雌株系该基因序列如SEQ ID No.2所示。

优选的是，包括以下步骤：

步骤一、采集罗汉果现蕾茎段，利用核酸纯化提取类试剂盒提取罗汉果的总RNA；