[发明专利]罗汉果性别基因SgACS2及其扩增方法

权利要求书

1.一种罗汉果性别基因SgACS2，其特征在于，雄株系该基因序列如SEQ ID No.1所示，雌株系该基因序列如SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的罗汉果性别基因SgACS2的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、采集罗汉果现蕾茎段，利用核酸纯化提取类试剂盒提取罗汉果的总RNA；

步骤二、利用反转录酶反转录步骤一所述的总RNA，反转录过程中加入接头引物，构建3'-RACE和5'-RACE cDNA模板库，利用DNA聚合酶进行PCR扩增，5'-RACE用接头引物和特异引物GST-F配对，得到5'-RACE-Ready cDNA，3'-RACE用接头引物和特异引物GST-R配对，得到3'-RACE-Ready cDNA，将PCR所得所有清晰片段进行回收纯化，与克隆载体连接处理并进行测序，经过生物信息分析软件拼接后得出罗汉果性别基因SgACS2全长cDNA序列如SEQ IDNo.3所示；

步骤三、在罗汉果性别基因SgACS2全长cDNA序列的非编码序列(UTR)上设计引物，利用核酸纯化提取类试剂盒提取罗汉果的总DNA，采用二引物法对提取的DNA进行PCR扩增，将PCR所得所有清晰片段进行回收纯化，与克隆载体连接处理并进行测序，经过生物信息分析软件拼接后得出罗汉果性别基因SgACS2全长DNA序列。

3.如权利要求2所述的罗汉果性别基因SgACS2的扩增方法，其特征在于，所述步骤二中，反转录过程中接头引物为5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'，特异引物GST-F为ACAGCGTTTCTGAACTCTGGTAATC，特异引物GST-R为TGCTTCGCGAATATGGACGACAAGACG。

4.如权利要求2所述的罗汉果性别基因SgACS2的扩增方法，其特征在于，所述步骤二中，PCR扩增分为两次完成，第一次PCR扩增反应具体参数如下：25个循环，94度变性30秒、68度退火30秒、72度延伸3分钟，得到第一次RACE结果；第二次降落PCR扩增反应具体参数如下：5个循环，94度变性30秒、72度退火与延伸3分钟；5个循环，94度变性30秒、70度退火30秒、72度延伸3分钟；25个循环，94度变性30秒、68度退火30秒、72度延伸3分钟，得到第二次RACE结果。

5.如权利要求2所述的罗汉果性别基因SgACS2的扩增方法，其特征在于，所述步骤三中，二引物法中，特异引物序列如下所示：

SgACS2-F2:CACTGGAAAATATGGTGCTGGAATCG

SgACS2-R1:CGTTAAAACTTGGTCAGAATCGAACCC。

6.如权利要求2所述的罗汉果性别基因SgACS2的扩增方法，其特征在于，步骤三中PCR扩增反应具体参数如下：94度预变性5分钟；34个循环，94度变性30秒、59度退火30秒、72度延伸3分钟；72度延伸7分钟。