[发明专利]一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法

说明书

本发明公开了一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法。本发明采用方法包括下列步骤：步骤1、化学固相合成法制备树脂肽；步骤2、配置碘的过饱和溶液，和步骤1制得的树脂肽反应的得到1号位和9号位半胱氨酸巯基已氧化二硫键的树脂肽；步骤3、洗涤脱除碘残留；步骤4、制备2号位和10号位半胱氨酸巯基已氧化二硫键的多肽；步骤5，得到粗品iRGD多肽；本发明的目的是提供一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法。其中固相定点氧化二硫键的合适保护策略及可以去除保护和氧化二硫键同时进行的特殊方法，达到了氧化速度更快，氧化效率更高，化合物更稳定的效果。

技术领域

本发明涉及多肽的合成及固相定点二硫键的方法，尤其涉及iRGD类多肽的成环方式。

背景技术

近年来多肽在主动靶向药物输送系统中的应用受到了广泛的关注。根据其效应的不同大致分为3类:1、单纯靶向肽,仅仅靶向到某一器官或特定组织, 没有细胞穿透的功能；2、细胞穿膜肽,本身没有靶向功能,但通过形成孔隙或者与特定受体的细胞表面接触时能够引起受体介导的内吞产生细胞膜穿透效应；3、靶向穿膜肽,本身具有靶向效应,并且到达特定部位后还能通过细胞表面受体介导细胞膜穿透效应递送药物。iRGD肽属于上述第3类多肽，是目前常用的肿瘤穿膜肽。

Kazuki N等就在2010年的Science上报道了肿瘤穿膜肽iRGD能够明显改善化疗药物在肿瘤组织中的渗透能力，提高药物疗效，由此引发了人们的广泛关注。

iRGD肽具体序列为

CCRGDKGPDC(Disulfide Bridge:C2-C10)

L-半胱氨酰-L-半胱氨酰-L-精氨酰-L-甘氨酰-L-天门冬氨酰-L-赖氨酰- L-甘氨酰-L-脯氨酰-L-天门冬氨酰-L-半胱氨酸(2号位半胱氨酰与10号位半胱氨酸巯基形成分子内二硫键)

序列：Cys-Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys(Disulfide Bridge:C2-C10)

分子量：1051.19

分子式：C38H62N14O15S3

结构式：

目前常用的二硫键成环技术方法中常采用液相定点二硫键方式进行成环，这种方法在生产过程中用时较长，步骤繁琐，成环后不能保证位点的明确化，同时易产生副反应形成二聚体。

发明内容

为了解决上述现有各种方法的不足，本发明的目的是提供一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法。本发明通过多次实验，找出其中固相定点氧化二硫键的合适保护策略及可以去除保护和氧化二硫键同时进行的特殊方法。

本发明用的多肽氧化二硫键方法多采用液相成环方式，本发明突破了一贯的方式，在多肽化学固相合成的基础上，提出固相定点氧化二硫键的合成方法。摒弃常用的液相成环方式，直接在固相的条件下直接定点氧化二硫键，达到了氧化速度更快，氧化效率更高，化合物更稳定的效果。

根据本发明的一方面提供了一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法，该方法包含如下步骤：

步骤1、化学固相合成法制备树脂肽Fmoc-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(O tbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys(Acm)-Linker Wang resin；

步骤2、配置碘的过饱和溶液，和步骤1制得的Fmoc-Cys(Acm)-Arg(Pb f)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys(Acm)-Linker Wang resin 反应的得到1号位和9号位半胱氨酸巯基已氧化二硫键的树脂肽