[发明专利]一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法

权利要求书

1.一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：

步骤1、化学固相合成法制备树脂肽Fmoc-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys(Acm)-Linker Wang resin；

步骤2、配置碘的过饱和溶液，和步骤1制得的Fmoc-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys(Acm)-Linker Wang resin反应的得到1号位和9号位半胱氨酸巯基已氧化二硫键的树脂肽

Fmoc-Cys-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys-LinkerWang resin；

步骤3、洗涤脱除碘残留；

步骤4、制备2号位和10号位半胱氨酸巯基已氧化二硫键的NH2-Cys(Trt)-Cys-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys-Linker Wang resin；

步骤5、裂解制备，得到粗品iRGD多肽NH2-Cys-Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys-COOH，所述粗品iRGD多肽2号位和10号位半胱氨酸巯基已氧化二硫键。

2.根据权利要求1所述的一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法，其特征在于，所述方法还可以包括如下步骤：

步骤6、将所述步骤5得到的iRGD多肽NH2-Cys-Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys-COOH的粗品进行纯化。

3.根据权利要求2所述的所述的一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

步骤7、冻干步骤6制得的纯化后的iRGD多肽。

4.根据权利要求3所述的一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

步骤8、对制得的iRGD多肽进行检测。

5.根据权利要求1所述的一种固相定点氧化二硫键合成iRGD多肽的方法，其特征在于，所述化学固相合成法制备树脂肽Fmoc-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys(Acm)-Linker Wang resin的方法如下：

称取替代度为0.65mmol/g的Wang resin树脂，加入至反应器中，加入DCM，打开保护气体自下而上冲混液体和Wang resin树脂使其均匀混合，滤掉溶剂，加入过量的Fmoc-Cys(Acm)-OH氨基酸，加入DMF溶解，再加入过量的HBTU、过量的HOBT、过量的DIEA和DMAP，反应；

而后加入吡啶和乙酸酐按1：1比例混合均匀的混合溶液封闭，滤掉溶剂，然后向反应器中加入哌啶/DMF溶液，所述哌啶/DMF溶液即脱帽液，在保护气体下搅拌反应，抽去液体，用DMF洗涤，再加入100ml所述脱帽液，搅拌反应后抽除，用DMF洗涤，再用甲醇洗涤，而后再用DMF洗涤，洗去脱下的Fmoc保护基；取树脂，用乙醇洗，加入检测试剂检测，105℃～110℃加热5min,变深蓝色为阳性反应；

加入过量的Fmoc-Asp(Otbu)-OH氨基酸，HBTU摩尔过量，用DMF溶解，加入反应器，加入DMF，立刻加入过量DIEA，反应；

抽去溶液，DMF洗涤3次，取十几粒树脂，用乙醇洗三次，加入检测试剂检测，105℃～110℃加热5min,无色为阴性反应；

通过重复脱除Fmoc保护基和投入氨基酸反应的方式依次加入后续氨基酸，直至完成序列Fmoc-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-Lys(Boc)-Gly-Pro-Asp(Otbu)-Cys(Acm)-Linker Wang resin；

加入甲醇洗，抽干。