[发明专利]细菌检测膜和制备方法及其细菌检测的方法

说明书

本发明公开了一种细菌检测膜和制备方法及其细菌检测的方法，属于生物化学技术领域。该细菌检测膜包括基材层及设置在基材层上的检测层，基材层由纳米纤维膜组成，检测层由具备显色功能的阳离子聚合物和阴离子聚合物组成，具备显色功能的阳离子聚合物和阴离子聚合物通过层层自组装的方式均匀交替组装设置在纳米纤维膜表面。本发明的细菌检测膜可在5分钟内快速的实现细菌的定性及精确定量测定，检测方法简单，因此，本发明的检测膜在环境、食品和临床医学领域都具备较好的应用。

技术领域

本发明涉及细菌检测，属于生物化学技术领域，具体地涉及一种细菌检测膜和制备方法及其细菌检测的方法。

背景技术

对常见细菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等进行高效、快速的检测是医疗卫生、食品安全、环境等各领域较为关注的问题之一。目前常用的检测方法通常需要借助于实验仪器，该种测定方法具备高度的选择性、专一性和准确性等的优点，缺点是检测周期长，如常见检测周期长达0.5天～7天，且检测过程繁琐、工作量大，此外，由于该种测定方法的技术要求高，通常需要专业人员实际操作，无法满足细菌实时检测的需要。因此，亟需发展能够快速、准确简便的检测细菌浓度的新型材料。

细菌的膜化检测是解决目前检测方法局限的有利方法，如中国发明专利申请(申请公开号：CN101676723A，申请公开日：2010-03-24)公开了一种用于检测检测鼠疫细菌感染的免疫层析膜及其制备方法。该免疫层析膜为将鼠疫耶尔森氏菌多糖抗原以及可与金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体固化在硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线，优点是特异性强、简便、快捷，缺点是抗原的使用增加了使用成本，且只能针对单种活体细菌进行检测。

中国发明专利申请(申请公开号：CN103048316A，申请公开日：2013-04-17)公开了生牛乳细菌总数检测膜制作方法及检测方法。利用二次浸渍、干燥成膜的方式制备得到的细菌检测膜，优点是为生牛乳初期的收集过程中提供了一种快速、有效及方便的细菌总数测定方法，缺点是检出精度不够，只能区分样本细菌含量是否在3×10⁵～20×10⁵CFU/ml的范围内，不能细分细菌浓度，适用样本中活体细菌总数初步检测。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明公开了一种能够精确检测细菌浓度的细菌检测膜和制备方法及其细菌检测的方法。

为实现上述目的，本发明公开了一种细菌检测膜，它还包括设置在所述基材层上的检测层，所述基材层由纳米纤维膜组成，所述检测层由具备显色功能的阳离子聚合物和阴离子聚合物组成，所述具备显色功能的阳离子聚合物和阴离子聚合物通过层层自组装的方式均匀交替组装设置在所述纳米纤维膜表面，所述具备显色功能的阳离子聚合物为异硫氰酸荧光素功能化的聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯，其分子式如式I所示；所述阴离子聚合物为聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸中的一种。

其中，式I中的x:y的数值介于1:10～1:20之间；优选，x:y＝1:11、x:y＝1:12、x:y＝1:13、x:y＝1:14、x:y＝1:15、x:y＝1:16、x:y＝1:17、x:y＝1:18；保证在对细菌的高精度识别基础上，分子的荧光强度较强，提高检测仪器的灵敏度。

优选的，所述层层自组装的作用力为静电吸附作用力，所述纳米纤维膜表面通过静电作用力吸附异硫氰酸荧光素功能化的聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的一端，所述异硫氰酸荧光素功能化的聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯的另一端通过静电作用力吸附聚丙烯酸分子或聚甲基丙烯酸分子。

进一步地，所述纳米纤维膜为聚乙烯-聚乙烯醇纳米纤维膜，所述聚乙烯-聚乙烯醇纳米纤维膜的厚度为100～300μm，克重为12～40gsm；同时纳米纤维膜上方的细菌检测膜厚度较小，相较于纳米纤维膜的厚度可忽略不计，故整个检测膜的厚度也较小，保证了测量结果的准确度。

为了更好的实现本发明，本发明还公开了制备上述细菌检测膜的方法，它包括如下步骤：