[发明专利]羊毛甾烷型三萜类化合物及其制备方法和用途

权利要求书

1.羊毛甾烷型三萜类化合物，其特征在于所述的羊毛甾烷型三萜类化合物为

结构式Ⅰ中R₁为а-L-Ara、R₂为H且R₃为CH₂OH，或者结构式Ⅰ中R₁为β-D-Glc、R₂为H且R₃为CH₂OH；结构式Ⅱ中R₁为β-D-Glc且R₂为CH₂OH。

2.如权利要求1所述的羊毛甾烷型三萜类化合物的制备方法，其特征在于所述的制备方法是按下述步骤进行的：

步骤一、将毛果南烛叶干燥后粉碎，用体积浓度为95％的乙醇提取3次，减压浓缩得到总浸膏；

步骤二、总浸膏加适量蒸馏水混悬，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取；

步骤三、步骤二萃取物的氯仿部位用硅胶按质量比1:1拌样，用CH₂Cl₂-MeOH按50:1→30:1→20:1→15:1→12:1→8:1→5:1→3:1→0:1进行梯度洗脱；

步骤四、将步骤三体积比为15：1的CH₂Cl₂-MeOH洗脱部位过正向硅胶柱划段，再用CH₂Cl₂-MeOH按40:1→30:1→20:1→15:1→10:1→5:1→0:1进行梯度洗脱，取体积比为(15～0)：1的CH₂Cl₂-MeOH洗脱部位，再经中压ODS柱子，填料为YMC GEL ODS-AS 50μm，Japan，依次用体积浓度为20％MeOH-H₂O、40％MeOH-H₂O、60％MeOH-H₂O、80％MeOH-H₂O洗脱，将80％甲醇-水洗脱部位经Sephadex LH-20柱子用纯MeOH洗脱，每20mL作为一个单位接收，经TLC检测，合并相同样点接受液浓缩至干，再经戴安P680高效液相色谱仪，UVD170紫外检测器，250×10nm，Welch的RP C-18柱子的半制备HPLC进一步分离，以80:20,v/v,流速:1.5mL/min的流动相MeCN-H₂O，检测波长设定为210nm,每次进样量为80μL，t_R＝33.3min时，得到3ɑ-O-ɑ-L-阿拉伯糖-24(S),25,30-三醇-羊毛甾-8-烯、t_R＝20.6min时，得到3α-O-β-D-葡萄糖-24(R),25,30-三醇-羊毛甾-8-烯和t_R＝22.8min时，得到3ɑ-O-β-D-葡萄糖-24(S),25,30-三醇-羊毛甾-8-烯；

按步骤三将体积比为12：1的CH₂Cl₂-MeOH洗脱部位，过聚酰胺柱子用蒸馏水洗脱，合并所得水部位，再过正向硅胶柱划段，以CH₂Cl₂-MeOH按30:1→20:1→15:1→10:1→5:1→0:1进行洗脱，收集其中15：1部分再经中压ODS柱子，以MeOH-H₂O按20:1，40:1，60:1，80:1进行洗脱，其中20.4g80％MeOH洗脱产品再经凝胶Sephadex LH-20分离，得到的粗品每20mL作为一个单位接收，经TLC检测，合并相同样点接受液浓缩至干，然后经HPLC纯化，以50:50:0.2,v/v/v,流速1.5mL/min的流动相MeCN-H₂O-CH₃COOH洗脱，检测波长设定为210nm,每次进样量为80μL，t_R＝38.1min下，得到3α-O-β-D-葡萄糖-24(R),25-二醇-羊毛甾-8-烯-30-酸，。

同时再收集步骤三体积比为20：1的CH₂Cl₂-MeOH洗脱部位再经中压ODS柱子，以MeOH-H₂O为流动相，依次按20:1，40:1，60:1，80:1进行洗脱，其中80％MeOH洗脱产品再经凝胶Sephadex LH-20分离，得到粗品每20mL作为一个单位接收，经TLC检测，合并相同样点接受液浓缩至干，经HPLC纯化，以70:30:0.1,v/v/v,流速1.5mL/min的流动相MeCN-H₂O-CH₃COOH，检测波长设定为210nm,每次进样量为80μL，t_R＝26.6min下，得到3-ɑ-O-ɑ-L-阿拉伯糖-羊毛甾-8-烯-24(S),25-二羟基-30-酸，t_R＝25.5min下，得到24-ɑ-O-ɑ-L-阿拉伯糖-羊毛甾-8-烯-3ɑ,25-二羟基-30-酸，t_R＝24.5min下，得到3-ɑ-O-ɑ-L-阿拉伯糖-羊毛甾-8-烯-24(R),25-二羟基-30-酸。