[发明专利]基于植物ITS2核基因DNA条形码对罂粟的鉴定方法

说明书

本发明提供基于植物核基因ITS2对罂粟科罂粟属罂粟(鸦片)的鉴定方法。该方法通过广泛调查罂粟属植物的分布区，采集到多个地点的样品，构建该属植物的ITS2序列的数据库，通过比对发现了罂粟特有的信息位点，在总长653bp的ITS2序列，第47bp为C，第55‑56bp为GG,第114bp为A，第131bp为G，第153为G，第219bp为A，第248bp为T，第494bp为C，第513‑516bp为TAAA，第552bp为G。利用上述位点与其他物种的差异即可鉴定出罂粟植物。

技术领域

本发明属于分子鉴定技术领域，具体涉及基于核基因ITS2DNA条形码的数据，并利用该数据进行罂粟(鸦片)鉴定的方法。

背景技术

罂粟(Papaver somnferium)是罂粟科(Papaveraceae)罂粟属(Papaver)植物。该属植物在中国约有7个种：罂粟(Papaver somniferum)、虞美人(P.rhoeas)、黑环罂粟(P.pavoninum)、长荚罂粟(P.dubium)、野罂粟(P.nudicaule)、灰毛罂粟(P.canescens)和长白山罂粟(P.radicatum)。其中罂粟也就是俗称的鸦片或大烟，原产于欧洲，最早发现于德国莱茵河流域，唐朝时期，由阿拉伯商人带入中国。在《全唐诗》中有众多关于咏吟罂粟花的诗作，但此时罂粟仅作为一种观赏花卉栽培。后在宋、元、明、清的医书皆有记载，可少量入药，有止痛、镇咳、镇静、止泻等功效。到十九世纪三十年代，外国鸦片大量走私中国，罂粟的种植也由南到北，一度遍布中国。一九四五年以后，在中国政府的严厉禁止下，罂粟(鸦片)才从此消声觅迹。但也有少量违法犯罪份子仍然不顾国家法律，私自种植罂粟(鸦片)，给国家和人民带来巨大的伤害，造成不可避免的损失。因此，坚决杜绝罂粟(鸦片)的出现是每个公民应尽的责任。然而，罂粟属植物外观较为相似，花、果实更是难以区分，无从分辨。特别是该属的植物虞美人(P.rhoeas)为园林绿化常用的观赏花卉，因与罂粟形态特征无明显分别，常被看作为毒品罂粟而引起市民的恐慌，带来不必要的损失。

DNA条形码(DNA barcoding)技术是直接利用分子DNA序列进行物种鉴定，具有独一无二的可重复性；在不同物种之间具有可比性，甚至全球物种鉴定可形成统一的标准；DNA条形码技术只需少数的通用引物，即可鉴定物种；DNA分子序列对于每个物种都是相对固定，变化较小，具有相对的稳定性。因此，DNA条形码技术现在广泛用于门、纲、目、科、属、种、变种的鉴定。

长期以来，ITS2是被用做植物DNA的条形码序列，作为分子系统进化研究中最重要的标记之一。同时，也被用作药用植物鉴定的标准条形码序列。其序列两端具有保守区便于通用引物设计；序列扩增较为容易；序列具有足够的可变性区域，可分辨不同的物种等优势。

目前，在罂粟属植物中，使用分子手段来鉴定物种的研究，还相对较少，因为物种的鉴定库构建的样品不足，有些样品极难采集，致使鉴定工作一直以来停留于传统的方法：在标本馆中查看标本，或网上搜索图片，导致鉴定工作存在一定的失误和误差，可靠性和准确性低。

发明内容

鉴于上述原因，为了克服现有技术中存在的不足之处，本发明的目的在于使用分子DNA条形码测序、通过找出罂粟(鸦片)碱基和该属其他物种的同一碱基位点的差异来鉴定。使用分子测序的方法，能够提高鉴定工作的准确性、可靠性和安全性。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

基于植物核基因ITS2对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，该方法使用罂粟属植物的ITS2核基因来检测罂粟(鸦片)，并找到罂粟的特有碱基作为它与罂粟属植物的序列差异的信息位点，由这些特征信息位点来区分罂粟属中与罂粟相似的植物。