[发明专利]一种使用叶绿体DNA条形码对罂粟的鉴定方法

说明书

本发明提供一种基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟(鸦片)的鉴定方法。该方法通过广泛调查罂粟属植物的分布区，采集到多个地点的样品，构建该属植物的叶绿体序列的数据库，通过比对发现了罂粟特有的信息位点：在总长2645bP的序列中，第105bp为A,第121bp为A,第333bp为A,第748bp为T,第1539bp为G,第1751bp为A,第2392bp为G,第2604bp为A。利用上述位点与其他物种的差异即可快速准确地鉴定出罂粟。

技术领域

本发明属于分子鉴定技术领域，具体涉及一种叶绿体DNA分子条形码的鉴定方法，对罂粟(Papaver somniferum)进行DNA条形码测序及分子鉴定。

背景技术

罂粟(Papaver somniferum L.)，又名鸦片、大烟，与大麻、古柯并称为世界三大毒品植物，一直是禁忌，被严格控制栽培和使用。其原产于南欧，为罂粟科(Papaveraceae)罂粟属(Papaver L.)植物。罂粟科约有700多个种，而罂粟属约有100个种。主要分布于欧洲至亚洲温带，少数种产于美洲、大洋洲和非洲。我国有7个种，分别为：罂粟(Papaversomniferum)、虞美人(P.rhoeas)、黑环罂粟(P.pavoninum)、长荚罂粟(P.dubium)、野罂粟(P.nudicaule)、灰毛罂粟(P.canescens)和长白山罂粟(P.radicatum)，主要分布于东北、西北、宁夏和内蒙古等地。该属植物花型优美，花色艳丽，多数为庭园栽培供观赏。如常见的种为虞美人，开花期长，花大，色彩鲜艳，其植株外形，花型与罂粟较为相似，二者无明显的可区别的形态特征。常被混淆，视为同种。但虞美人以及该属的其他种植物并未发现其具有成瘾的作用。这给公安机关缉毒、鉴定、取证等工作带来很大的干扰，造成了国家不必要的损失。

DNA条形码技术(DNA Barcoding)是一种快速鉴定物种的技术，其主要的手段是通过物种的DNA分子序列的几种片段测序，准确的区分几种相似的物种。近十年来，DNA条形码被大量使用在生物鉴定工作中，并被证明是行之有效的方法，其极大的解决了传统鉴定工作中的出现的较为相识物种无法辨认的漏洞，也对鉴定工作中鉴定人员出现的对数量性状的认知常常因人而异的现状，做出了更为客观、准确、公正、快速的补充。由于matK、psbA-trnH、rbcL和trnL-trnF四个片段在高等植物叶绿体基因组中具有较高的进化速率，遗传变异大，在大多数的植物内群中，常用于植物科、属水平的鉴定研究。

目前，在对罂粟(鸦片)的鉴定工作，除了请专业的研究人员来鉴定区别。还没有使用分子的手段来进行鉴定的报道。现有鉴定方法存在着大量时间的花费，人力、物力资源的浪费的问题，也存在着可靠性差，准确率低，甚至不安全的情况。

发明内容

有鉴于此，为了克服现有技术存在的上述缺点，本发明的目的在于提供一种较为明确、快速、可靠的基于罂粟属植物DNA条形码，并利用该DNA条形码鉴定罂粟(鸦片)的方法，来提高鉴定结果的可靠性、安全性和准确性。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，使用罂粟属植物的叶绿体基因来检测罂粟，并找到罂粟的特有碱基作为它与罂粟属植物的序列差异的信息位点，由这些特征信息位点来区分罂粟属中与罂粟相似的植物。

根据所述的基于植物叶绿体基因DNA对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其中所述的罂粟的叶绿体DNA条形码基因总长为2645bP的序列，第105bp为A,第121bp为A,第333bp为A,第748bp为T,第1539bp为G,第1751bp为A,第2392bp为G,第2604bp为A。根据所述的基于植物叶绿体基因DNA对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其中所述DNA条形码的序列如matK、psbA-trnH、rbcL和trnL-trnF四个片段所示。

本发明同时提供了一种基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，该方法主要包括下述步骤：