[发明专利]一种使用叶绿体DNA条形码对罂粟的鉴定方法

权利要求书

1.基于植物叶绿体基因DNA对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，使用罂粟属植物的叶绿体基因来检测罂粟(鸦片)，并找到罂粟的特有碱基作为它与罂粟属植物的序列差异的信息位点，由这些特征信息位点来区分罂粟属中与罂粟相似的植物。

2.根据权利要求1所述的基于植物叶绿体基因DNA对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其特征在于所述的罂粟的叶绿体DNA条形码基因总长为2645bP的序列，其中第105bp为A,第121bp为A,第333bp为A,第748bp为T,第1539bp为G,第1751bp为A,第2392bp为G,第2604bp为A。

3.根据权利要求1所述的基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其特征在于，所述DNA条形码的序列如matK、psbA-trnH、rbcL和trnL-trnF四个片段所示。

4.基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其特征在于该方法主要包括下述步骤：

(1)提取待测样本DNA；

(2)利用DNA条形码引物进行PCR扩增，得到扩增产物，所述的DNA条形码引物序列为matK、psbA-trnH、rbcL和trnL-trnF四个片段；

(3)对所述扩增产物进行测序，按照下列特异性位点进行罂粟植物的物种鉴定，罂粟的特征位点为：总长2645bP的序列中，第105bp为A,第121bp为A,第333bp为A,第748bp为T,第1539bp为G,第1751bp为A,第2392bp为G,第2604bp为A；

(4)对待测的疑似罂粟(鸦片)物种的扩增产物进行测序，如果符合上述(3)所列条件，则该待测样本为罂粟(鸦片)；如果不符合上述(3)的条件，则该待测样本不是罂粟。

5.根据权利要求4所述的基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其特征在于所述PCR的扩增体系为25μL，体系包含Mg Cl₂2.0μL，d NTP 2.0μL，PCR缓冲液2.5μL，引物各1.0μL，ex Taq酶1.25U，总DNA 2.5μL；所述PCR的扩增条件为：94℃变性5min，1个循环；94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸45s，进行30个循环；72℃延伸10min。

6.根据权利要求4所述的基于植物叶绿体基因DNA条形码对罂粟科罂粟属罂粟的鉴定方法，其特征在于，所述测序为双向测序，所述的测序引物为matK、psbA-trnH、rbcL和trnL-trnF四个片段所示；所述测序的反应体系为5μL：其中ddH₂O 3μL，10μmol/L测序引物0.5μL，测序反应混合物0.5μL，PCR纯化产物1μL；所述测序的反应条件为：94℃预变性10s；94℃变性30s，50℃退火5s，60℃延伸4min,进行30个循环。

7.一种基于大数据的罂粟DNA条形码，其特征在于所述的罂粟DNA条形码为由引物序列matK、psbA-trnH、rbcL和trnL-trnF四个片段，得到的总长为2645bP的序列，第105bp为A,第121bp为A,第333bp为A,第748bp为T,第1539bp为G,第1751bp为A,第2392bp为G,第2604bp为A。