[发明专利]人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法和人脐带间质干细胞外泌体的应用有效
| 申请号： | 201810168252.3 | 申请日： | 2018-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN108103017B | 公开（公告）日： | 2019-10-18 |
| 发明（设计）人： | 许文荣;孙瑶湘;钱晖;张斌;史惠;纪成;孙丰田;严永敏;张徐;毛飞 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;A61K35/28;A61P3/10 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 212000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 间质干细胞 人脐带 分离纯化 糖尿病动物模型 蔗糖 应用 胰岛素分泌功能 胰岛素信号通路 降低免疫反应 无血清培养基 医药技术领域 肝糖原合成 葡萄糖代谢 胰岛β细胞 超滤浓缩 密度离心 浓缩液移 上清液 胰岛素 活化 可控 稳态 制备 重水 血糖 糖尿病 分解 治疗 保证 | ||
1.人脐带间质干细胞外泌体在制备降低二型糖尿病血糖含量药物中的应用；
所述人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法，包括以下步骤：
(1)将人脐带间质干细胞在无血清培养基上培养45～50h，收集培养上清液，离心，收集上层液，得到人脐带间质干细胞外泌体粗液；所述离心的转速为1800～2000g；所述离心的时间为8～12min；
(2)将所述步骤(1)中人脐带间质干细胞外泌体粗液经超滤浓缩离心，得到浓缩液；所述超滤用超滤膜为100000Da规格；所述离心速度为1000～2000g；所述离心时间为15～20min；
(3)将所述步骤(2)中的浓缩液移至质量浓度为30％的蔗糖重水密度垫上，在4℃条件下，80000～160000g密度梯度离心120min，收集底部缓冲垫；
(4)将所述步骤(3)中底部缓冲垫经PBS溶液洗涤后置于100000Da MWCO超滤离心管中洗涤，收集浓缩液，得到人脐带间质干细胞外泌体。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中培养的温度为36～38℃；所述培养时环境CO2的体积浓度为4％～6％。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤(4)中收集浓缩液后，还包括将所述浓缩液进行过滤除菌；所述过滤用滤膜的孔径为0.22μm。
4.人脐带间质干细胞外泌体在制备提高二型糖尿病胰岛素分泌能力的药物中的应用；
所述人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法为权利要求1~3任意一项所述应用中人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法。
5.人脐带间质干细胞外泌体在制备提高二型糖尿病对胰岛素的敏感性的药物中的应用；
所述人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法为权利要求1~3任意一项所述应用中人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法。
6.人脐带间质干细胞外泌体在制备治疗二型糖尿病的药物中的应用；
所述人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法为权利要求1~3任意一项所述应用中人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物中人脐带间质干细胞外泌体治疗二型糖尿病的有效剂量为8～12mg/kg·bw。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂。
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