[发明专利]抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗及其制备与应用

说明书

本发明提供了一种抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗及其制备与应用。疫苗包括(1)DNA质粒含有一种或是多种抗原蛋白的基因或者一种或多种抗原肽的基因，(2)重组蛋白质是将编码一种或者多种目的抗原蛋白或者抗原肽的基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并表达得到，其中重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷；DNA质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式成为免疫原性组合物颗粒。在小鼠黑色素瘤荷瘤治疗实验中证实，该纳米颗粒疫苗显示出显著的抗肿瘤疗效，同时激发了细胞与体液免疫应答来实现的。本研究提供了一种全新的疫苗形式，对于黑色素瘤具有潜在的治疗价值。

技术领域

本发明涉及抗黑色素瘤疫苗领域，尤其涉及一种抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗及其制备与应用。

背景技术

在过去10多年研究中，肿瘤免疫治疗日益成为恶性肿瘤治疗的重要手段，具有巨大的发展潜力与前景。目前肿瘤免疫治疗主要包括以下几个部分：一、针对免疫检查点(如PD-1,PD-L1,CTLA-4等)的单抗药物，如Opdivo, Durvalumab,Keytruda，Ipilimumab，显示出针对多种恶性肿瘤的显著疗效；二、针对肿瘤抗原包括肿瘤特异性抗原(TSA)和肿瘤相关抗原(TAA)的靶向单克隆抗体，如抗-CD20(利妥昔单抗)，抗Her-2(曲妥珠单抗)，抗VEGF/VEGFR (贝伐珠单抗)等；三、CAR-T技术治疗非实体瘤尤其是B细胞型白血病疗效显著，2017年美国FDA批准了第一个CAR-T疗法的产品Kymriah；四、肿瘤治疗性疫苗：是一种主动免疫治疗策略，旨在调动激活机体抗肿瘤免疫应答，目前已有肿瘤治疗性疫苗上市-Provenge，用于治疗晚期前列腺癌，此外，包括 DNA疫苗、蛋白质疫苗、DC疫苗、针对个体化肿瘤抗原疫苗等疫苗形式仍在研发中，尚无投入临床使用，主要面临的问题在于不能激发足够强度的免疫应答，打破肿瘤免疫耐受，治疗效果不理想。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗及其制备与应用，试图通过DNA-蛋白质通过静电耦合为纳米颗粒疫苗，激活机体自身抗肿瘤免疫，增强细胞免疫与体液免疫，打破肿瘤免疫耐受，从而达到控制或清除肿瘤的目的。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种免疫原性组合物，包括(1)DNA质粒，DNA质粒含有一种或是多种抗原蛋白的基因或者一种或多种抗原肽的基因，DNA质粒在pH6.0～8.0的环境下带负电荷；(2)重组蛋白质，重组蛋白质是将编码一种或者多种目的抗原蛋白的基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并表达得到，或者重组蛋白质是重组蛋白质是编码一种或者多种目的抗原肽的基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并表达得到，其中重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷； DNA质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式复合为免疫原性组合物颗粒。

最优的，所述免疫原性组合物颗粒是纳米级颗粒；所述DNA质粒的浓度和重组蛋白质的浓度比为1～100:1～100。

一种抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗，包括(1)DNA质粒，DNA质粒含有Survivin 基因CDS序列，DNA质粒在pH6.0～8.0的环境下带负电荷；(2)重组蛋白质，重组蛋白质是将编码Survivin抗原蛋白基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并重组表达得到，其中重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷；DNA 质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式复合为抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗。

最优的，所述抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗是粒径为50～500nm的纳米级颗粒；所述DNA质粒浓度和重组蛋白质浓度比为5:1；所述阳离子肽的氨基酸序列如 SEQ ID NO:1。