[发明专利]抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗及其制备与应用

权利要求书

1.一种免疫原性组合物，其特征在于：包括(1)DNA质粒，DNA质粒含有一种或是多种抗原蛋白的基因或者一种或多种抗原肽的基因，DNA质粒在pH6.0～8.0的环境下带负电荷；(2)重组蛋白质，重组蛋白质是将编码一种或者多种目的抗原蛋白的基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并表达得到，或者重组蛋白质是重组蛋白质是编码一种或者多种目的抗原肽的基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并表达得到，其中重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷；DNA质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式复合为免疫原性组合物颗粒。

2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于：所述免疫原性组合物颗粒是纳米级颗粒；所述DNA质粒的浓度和重组蛋白质的浓度比为1～100:1～100。

3.一种抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗，其特征在于：包括(1)DNA质粒，DNA质粒含有Survivin基因CDS序列，DNA质粒在pH6.0～8.0的环境下带负电荷；(2)重组蛋白质，重组蛋白质是将编码Survivin抗原蛋白基因与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并重组表达得到，其中重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷；DNA质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式复合为抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗。

4.根据权利要求3所述的抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗，其特征在于：所述抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗是粒径为50～500nm的纳米级颗粒；所述DNA质粒浓度和重组蛋白质浓度比为5:1；所述阳离子肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1。

5.一种抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗，其特征在于：包括(1)DNA质粒，DNA质粒含有Survivin基因的一段优势蛋白抗原肽Survivin-2B的CDS序列，DNA质粒在pH6.0～8.0的环境下带负电荷；(2)重组蛋白质，重组蛋白质是将编码Survivin基因的一段优势蛋白抗原肽Survivin-2B的CDS序列与编码阳离子肽的基因通过连接臂连接并重组表达得到，其中重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷；DNA质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式复合为抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗。

6.根据权利要求5所述的抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗，其特征在于：所述抗黑色素瘤纳米颗粒疫苗是粒径为150～300nm的纳米级颗粒；所述DNA质粒浓度和重组蛋白质的浓度比为3:1；所述阳离子肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1。

7.一种免疫原性组合物的制备，其特征在于：制备权利要求1～2中任意一项所述的免疫原性组合物，包括以下步骤，

真核克隆载体构建：在真核克隆载体中插入或者添加编码一种或多种抗原蛋白的基因、编码一种或多种抗原肽的基因中的至少一种，得到DNA质粒；

原核表达载体构建及表达：在原核表达载体中插入或者添加一段重组序列，诱导表达重组序列得到重组蛋白质，重组蛋白质在pH6.0～8.0的环境下带正电荷；重组序列包括编码一种或者多种目的抗原蛋白的基因、连接臂、编码阳离子肽的基因，其中一种或者多种目的抗原蛋白的基因与编码阳离子肽的基因是以连接臂的形式连接；

静电耦合成纳米颗粒：将DNA质粒和重组蛋白质混合，DNA质粒和重组蛋白质以静电耦合的方式复合为免疫原性组合物颗粒。