[发明专利]一种检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒原理基于胶乳增强免疫比浊法，其技术方案在于其含有h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒，h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒先由无花果蛋白酶将h－FABP抗体切割成F(ab')2片段，再将F(ab')2片段交联于羧基胶乳微球上，形成h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒，从而显著降低Fc的非特异性结合，实现与样本抗原高效结合，在37℃恒温，波长为520nm下，测定吸光度，计算出样品心型脂肪酸结合蛋白(h－FABP)含量。与传统方法相比，本试剂盒抗体利用率高，准确度高，能有效控制批间差，值得进一步推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检测试剂盒领域，具体涉及一种检测心型脂肪酸结合蛋白(h－FABP)的试剂盒。

背景技术

心型脂肪酸结合蛋白(h－FABP)是心脏中富含的一种新型小胞质蛋白。由132个氨基酸组成，分子量为15kDa。它具有高度心脏特异性，主要存在于心肌细胞中，但在心脏以外的组织中也有低浓度表达，如骨骼肌中存在微量。在心脏全部可溶性蛋白中h－FABP约占4％～8％。h－FABP可以和心肌内的长链脂肪酸相结合，将其转运到线粒体中，最终氧化分解成三磷酸腺苷ATP，为心肌活动提供能量。因此h－FABP是重要的能源脂肪酸的载体蛋白。由于正常人的血浆和尿中不含或只含极微量h－FABP，当心肌细胞受损时，h－FABP被快速释放到血液和尿中，在AMI的超急性期h－FABP的浓度在血液和尿中显著升高。因此h－FABP的浓度变化可作为AMI早期诊断的较好指标且其敏感性和可预见性均较为理想。

目前市场上心型脂肪酸结合蛋白(h－FABP)检测技术常用的方法有如下几种：放射免疫测定法(RIA)、荧光免疫测定法(FIA)、时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)、酶联免疫测定法(ELISA)、免疫传感器技术、免疫胶体金技术、胶乳增强免疫比浊法等，以胶乳增强免疫比浊法居多。胶乳增强免疫比浊法属于普通免疫比浊技术的衍生技术，克服了普通免疫比浊技术信号量非常有限的缺点，使抗体体积有了数量级上的增长，大幅提升了可检测性，但该方法也存在巨大的技术难点，即抗体连接到胶乳微球上的方向无法控制，使得其活性及稳定性(包括不随时间的改变而发生变化及批间一致性)不能保证。因此，找到一种抗体与胶乳微球间有效偶联的方法，是本领域亟需解决的技术问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种检测心型脂肪酸结合蛋白(h－FABP)的试剂盒，以胶乳增强免疫比浊法为基础，该试剂盒中含有h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒，该h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒运用抗体片段化技术，先由无花果蛋白酶将h－FABP抗体切割成F(ab')2片段，再将F(ab')2片段交联于羧基胶乳微球上，形成h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒，从而显著降低Fc的非特异性结合，实现与样本抗原高效结合。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：试剂盒包括由试剂1和试剂2组成的液体双试剂组分，其中

所述试剂1成分如下：

磷酸盐缓冲液pH6.0-7.0 0.1-0.5mol/L

聚乙二醇8000 9-15g/L

叠氮钠 0.01wt％

所述试剂2成分如下：

所述试剂1与试剂2的体积比为3:1。

进一步设置是所述的h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒的通用以下方法制备：运用抗体片段化技术，在含半胱氨酸的缓冲环境下，先由无花果蛋白酶对h－FABP抗体进行切割，形成h－FABP抗体F(ab')2片段和Fc的多肽碎片，经Protein A离心柱洗脱纯化，去除Fc的多肽碎片，获得纯化的h－FABP抗体F(ab')2片段，再将h－FABP抗体F(ab')2片段交联于羧基胶乳微球上，形成h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒。