[发明专利]一种检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒

权利要求书

1.一种检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括由试剂1和试剂2组成的液体双试剂组分，其中

所述试剂1成分如下：

磷酸盐缓冲液pH6.0-7.0 0.1-0.5mol/L

聚乙二醇8000 9-15g/L

叠氮钠 0.01wt％

所述试剂2成分如下：

所述试剂1与试剂2的体积比为3:1。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒的通用以下方法制备：运用抗体片段化技术，在含半胱氨酸的缓冲环境下，先由无花果蛋白酶对h－FABP抗体进行切割，形成h－FABP抗体F(ab')2片段和Fc的多肽碎片，经Protein A离心柱洗脱纯化，去除Fc的多肽碎片，获得纯化的h－FABP抗体F(ab')2片段，再将h－FABP抗体F(ab')2片段交联于羧基胶乳微球上，形成h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包括如下步骤：

(1)由无花果蛋白酶将h－FABP抗体切割成F(ab')2片段；

将鼠抗人h－FABP抗体用离心式去盐柱脱盐，所用缓冲液为0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)；取相同的磷酸盐缓冲液20ml，加入无花果蛋白酶1mg，1mol/L半胱氨酸溶液1ml，0.5mol/L EDTA溶液1ml，置于37℃，100r/min恒温水浴摇床中均匀溶解2h；过Sephadex G50柱，并用0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)进行洗脱，收集获得含活化的无花果蛋白酶酶溶液，并浓缩至原体积；以体积比5：1混合透析后的鼠抗人h－FABP抗体与活化无花果蛋白酶酶溶液，置于37℃，100r/min恒温水浴摇床中酶解3h，3h后再次加入等量的活化无花果蛋白酶酶溶液继续酶解3h，重复三次；酶解结束后加入0.1mmol/L碘乙酰胺0.5ml冰浴1h终止反应；过Protein A离心柱，并用含0.1mol/LNaCl的0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)进行洗脱，最后用超纯水透析24h，收集获得h－FABP抗体F(ab')2片段，置于2-8℃保存；

(2)将F(ab')2片段交联于羧基胶乳微球上，形成h－FABP抗体片段复合胶乳颗粒；

取粒径为120nm浓度为10％胶乳微球1ml，加入0.2mol/L、pH6.5的磷酸盐缓冲液9ml，室温震荡2mins，混合均匀后迅速加入120μl EDC水溶液(50mg/ml)，加入150μl N-羟基硫代琥珀酰亚胺水溶液(100mg/ml)，室温搅拌40min，2-8℃离心30min(转速15000rpm)，用0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)洗涤三次，除去上清液，沉淀用0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)1ml超声重悬；取0.5mlh－FABP抗体F(ab')2片段，加入0.5ml胶乳微球重悬液，室温搅拌1h，再重复加入0.5ml胶乳微球重悬液，继续室温搅拌3h，加入400μl 5％盐酸羟胺水溶液淬灭试剂和200μl 1％BSA水溶液，室温震荡1h；4℃离心30min(转速15000rpm)，沉淀用0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)洗涤三次，除去上清液，用0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)1ml超声分散30min，2-8℃密封保存。