[发明专利]用于检测核酸序列变体的方法

权利要求书

1.一种引物开关，其包含

(a)正向引物；和

(b)共价或非共价连接或接合至所述正向引物的选择子阻断剂，其中所述选择子阻断剂是不可延伸的，

其中所述正向引物和选择子阻断剂各包含与靶区中的相同序列互补的序列，不同之处在于，它们在出现核酸变体的一个或多个位置上有不同；其中所述靶区包含一个或多个可能存在或不存在核酸变体的位置，其中(i)所述选择子阻断剂和正向引物能够与靶区中重叠的序列杂交，使得与所述靶区杂交的所述正向引物的3’端和与所述靶区杂交的所述选择子阻断剂的5’端重叠；或者(ii)所述选择子阻断剂能够在相对于所述正向引物的3’杂交。

2.权利要求1的引物开关，其中所述正向引物和选择子阻断剂经由交联剂或S18间隔子共价或非共价连接或接合。

3.权利要求1的引物开关，其中所述选择子阻断剂包含所述核酸变体不存在下与所述靶区中的序列互补的序列。

4.权利要求1的引物开关，其中所述正向引物和选择子阻断剂包含相同的序列。

5.权利要求1的引物开关，其中所述正向引物具有与所述靶区互补的序列，但出现核酸变体的位置除外，且所述选择子阻断剂具有所述核酸变体存在下与所述靶区互补的序列。

6.权利要求1的引物开关，其中所述正向引物具有与包含核酸变体的靶区互补的序列，且所述选择子阻断剂具有所述变体不存在下与靶区互补的序列。

7.权利要求1的引物开关，其中所述引物开关通过下述生成：使用3’至5’化学合成所述正向引物，插入至少一个S18间隔子，并使用5’至3’化学逆转链的方向以合成所述选择子阻断剂。

8.权利要求1的引物开关，其中所述引物开关进一步包含可检测的实体。

9.权利要求8的引物开关，其中所述可检测的实体选自下组：荧光标记、化学发光标记和FRET对。

10.引物开关供制备用于检测靶区内是否存在核酸变体的试剂的用途，所述检测包括

引物开关和反向引物存在下扩增所述靶区，其中所述引物开关包含

(a)正向引物；和

(b)共价或非共价连接至或接合至所述正向引物的选择子阻断剂，其中所述选择子阻断剂是不可延伸的，且其中所述选择子阻断剂和所述正向引物各包含与所述靶区中的序列互补的序列，不同之处在于，它们在出现核酸变体的一个或多个位置上有不同；其中所述靶区包含一个或多个可能存在或不存在核酸变体的位置，其中(i)所述选择子阻断剂和正向引物能够与靶区中重叠的序列杂交，使得与所述靶区杂交的所述正向引物的3’端和与所述靶区杂交的所述选择子阻断剂的5’端重叠；或者(ii)所述选择子阻断剂能够在相对于所述正向引物的3’杂交；

其中(i)所述选择子阻断剂能够与所述靶区紧密结合，从而所结合的引物开关的选择子阻断剂部分作为空间阻断剂预防所述正向引物的延伸，或(ii)由于存在核酸变体所述引物开关的选择子阻断剂部分不能与所述靶区紧密结合，从而所述正向引物能够延伸；且

其中所述靶区的扩增指示所述靶区中所述核酸变体的存在且其中所述扩增的不存在指示所述靶区中所述核酸变体的不存在。

11.权利要求10的用途，其中所述核酸变体包括缺失、突变或插入。

12.权利要求10的用途，其中所述扩增在具有3’外切核酸酶修复活性的酶存在下进行。