[发明专利]叶酸检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种结合有叶酸多聚半抗原的纳米微球的制备方法，所述方法包括步骤：

第一步骤，其包括：

1.1)对叶酸进行活化，得到活化的叶酸；

1.2)将所述活化的叶酸偶联至惰性蛋白，得到叶酸-惰性蛋白偶联物；

1.3)提供第一纳米微球，并将所述第一纳米微球偶联至所述叶酸-惰性蛋白偶联物，所述第一纳米微球的直径为80nm；

1.4)对步骤1.3)得到的纳米微球进行封闭，得到低活性抗原-纳米微球，

第二步骤，其包括：

2.1)对第二纳米微球进行活化，得到活化的第二纳米微球，所述第二纳米微球的直径为300nm；

2.2)将惰性蛋白偶联至所述活化的第二纳米微球，得到结合有惰性蛋白的纳米微球；

2.3)提供叶酸，并将所述叶酸偶联至所述结合有惰性蛋白的纳米微球；

2.4)对步骤2.3)得到的纳米微球进行封闭，得到高活性抗原-纳米微球，

第三步骤：将所述高活性抗原-纳米微球和所述低活性抗原-纳米微球按照质量比1：2至1：6混合，

其中所述第一步骤和所述第二步骤的顺序是并行的、或者可互换的；

所述第一纳米微球和第二纳米微球由聚苯乙烯聚合而成。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中：

所述第一纳米微球和第二纳米微球是羧基修饰的纳米微球。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中：

所述高活性抗原-纳米微球和所述低活性抗原-纳米微球按照质量比1：4进行混合。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述的活化是采用选自如下的试剂进行的：

4-羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠、碳酸钠、乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺、戊二醛、或其组合。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述惰性蛋白质选自：牛血清白蛋白、酪蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白。