[发明专利]超分子自组装介导网状纳米金增强免疫层析试纸条灵敏度的新方法

说明书

本发明提供了一种放大胶体金免疫层析比色信号强度的方法，包括：用金刚烷胺标记的牛血清白蛋白封闭金标抗体，得到金标抗体I；用β‑环糊精合成胶体金纳米粒子，得到β‑环糊精包被的胶体金溶液；在使用金标抗体I执行双抗夹心胶体金免疫层析的体系内加入待测样品后，再加入所述β‑环糊精包被的胶体金溶液；再在体系内多次重复加入5,10,15,20‑四(4‑羧基苯基)卟啉与β‑环糊精包被的胶体金溶液的混合溶液。本发明的方法利用超分子自组装原理介导形成网状纳米金，实现了循环信号放大，从而大大提高检测线和质控线上金纳米粒子的显色强度，可实现对超低浓度目标检测物进行现场快速检测的目的。本发明还提供一种用于胶体金免疫层析法的高灵敏度试剂盒。

技术领域

本发明涉及免疫层析分析技术领域，进一步涉及胶体金免疫层析法中比色信号强度的放大方法及试纸条的改进，具体涉及一种基于超分子自组装介导网状纳米金增强免疫层析分析灵敏度的新方法。

背景技术

胶体金免疫层析试纸条因其简单、快速、方便以及裸眼检测已被广泛应用于临床诊断、食品安全检测以及环境监控等领域。传统胶体金免疫层析试纸条主要采用粒径为20～40nm胶体金作为信号探针，然而由于其较小的粒径导致其比色信号强度相对偏弱，进而导致其检测灵敏度偏低。相对较低的检测灵敏度在一定程度上局限了其在超灵敏检测中的应用。近些年，随着纳米科学和技术的快速发展，各种各样的新型纳米材料如荧光微球、量子点、量子点微球、上转换荧光纳米粒子、碳纳米材料以及磁性材料已经被报道可用于替代胶体金作为检测探针提高传统免疫层析试纸条的检测灵敏度，但这些纳米探针的合成相对复杂，价格昂贵很难被市场推广使用。相对于这些新型纳米材料，胶体金因其合成简单、易修饰、生物相容性好、光学性质稳定以及易读取等优势一直以来在免疫层析试纸条占据主要的位置，特别是在商业化生产中，其市场占有率达90％以上。因此，如何提高传统胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度对于进一步拓展其在超灵敏检测中的应用具有重要意义。

现今，提高传统胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法主要包括以下几类：1)读条仪的开发：通过优化胶体金免疫层析试纸条读取仪信号采集、信号增强、以及数据处理等方面来提高其检测灵敏度，如专利CN103018439A；2)金或银染增强技术：在传统胶体金免疫层析试纸条的基础上，当还原剂存在的情况下，金或银离子容易以胶体金为核心，聚集在胶体金表面还原成金或银原子，使纳米级大小的胶体金通过金或银离子的聚集和还原生长为更大的颗粒，从而使胶体金的比色信号得到放大，如专利CN102135536A；3)酶增强技术：在传统胶体金免疫层析试纸条的基础上，通过引入辣根过氧化物酶或具有过氧化物酶活性的纳米酶催化氧化相应的底物如四甲基联苯胺(TMB)等生成有色的沉淀物沉积于检测线，从而使胶体金的比色信号得到放大；4)双金信号放大：在传统胶体金免疫层析试纸条的基础上，通过引入信号扩增金标垫，其可以借助抗原抗体反应和生物素-链霉亲和素系统等特异性地在检测线结合金标抗体偶联物，导致胶体金纳米粒子的进一步聚集，从而放大胶体金的比色信号，如专利CN102507929A；5)杂化金纳米复合物：将胶体金纳米粒子通过物理或化学方法结合到更大载体如磁性纳米粒子、二氧化硅纳米粒子等颗粒的表面，从而增加检测线结合的胶体金数量，进而放大其检测信号。虽然这些方法在一定程度上提高了传统胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度，但其提高检测灵敏度的能力是有限的，仅为1～2个数量级。因此，增强后的胶体金免疫层析试纸条依然无法满足超灵敏检的要求。

发明内容

本发明旨在针对现有胶体金免疫层析试纸条因其20～40nm胶体金探针信号强度偏弱导致检测灵敏度偏低的现状缺陷，使用超分子自组装介导网状纳米金形成，促使胶体金纳米粒子在试纸条检测线不断积累，提供一种增强免疫层析分析灵敏度的新方法，实现对超低浓度目标检测物进行现场快速检测的目的。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

首先，本发明提供一种放大胶体金免疫层析比色信号强度的方法，包括：