[发明专利]超分子自组装介导网状纳米金增强免疫层析试纸条灵敏度的新方法

权利要求书

1.一种放大胶体金免疫层析比色信号强度的方法，包括：

1)用金刚烷胺(ADA)标记的牛血清白蛋白(BSA)封闭金标抗体，得到金标抗体I；用β-环糊精(β-CD)合成胶体金纳米粒子，得到β-CD包被的胶体金溶液；步骤1)所述的用ADA标记的BSA封闭金标抗体通过以下方法完成：

I)柠檬酸包被胶体金溶液在7.0～8.0pH值下与鼠抗目标分析物检测抗体溶液于室温下振荡反应28～32min，得到混合溶液；

II)将ADA标记的BSA溶液加入步骤I)所得混合溶液中继续于室温下振荡反应28～32min；

III)将步骤II)所得溶液在3～5℃条件下于8000～10000rpm离心18～22min，得到沉淀物，所述沉淀物复溶于0.01M pH7.4的PBS中，得到用ADA标记的BSA封闭的金标抗体

2)在使用步骤1)所得金标抗体I执行双抗夹心胶体金免疫层析的体系内加入待测样品后，再加入步骤1)得到的β-CD包被的胶体金溶液，实现一次信号放大；

3)在步骤2)完成一次信号放大的体系内多次重复加入5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉(TCPP)与步骤1)所述β-CD包被的胶体金溶液的混合溶液，实现循环信号放大。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的ADA标记的BSA通过以下方法制备：

配制浓度为0.8～1.2mg/mL的金刚烷胺溶液，向溶液中分别加入N-羟基丁二酰亚胺溶液和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液，使N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐的重量比在1:1.5～2.5，于室温避光反应60min完成活化；将活化后的溶液与含BSA浓度为3.0mg/mL的碳酸氢钠溶液混合，于室温避光反应12h；反应完毕后透析去除游离的金刚烷胺，即得到ADA标记的BSA。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)所述的β-CD包被的胶体金溶液通过以下方法制备：

i)于剧烈搅拌下，依次将5mL 0.1M磷酸缓冲溶液PBS，pH 7.0、1mL 0.01M氯金酸溶液HAuCl₄和10mL 0.01Mβ-CD溶液加入至35mL超纯水中；于90～110℃反应55～60min；

ii)待步骤i)反应后溶液冷却后于8000～10000rpm离心8～10min，得到所述的β-CD包被的胶体金溶液。

4.一种用于胶体金免疫层析法的试剂盒，其特征在于：它包括胶体金免疫层析试纸条和比色信号放大试剂；所述的胶体金免疫层析试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素(NC)膜和吸水纸，所述的结合垫上设有用ADA标记的BSA封闭的金标抗体，所述的硝酸纤维素(NC)膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)；所述的比色信号放大试剂包括TCPP溶液和β-CD包被的胶体金溶液；

所述的用ADA标记的BSA封闭的金标抗体通过以下方法制备：

I)柠檬酸包被胶体金溶液在7.0～8.0pH值下与鼠抗目标分析物检测抗体溶液于室温下振荡反应28～32min，得到混合溶液；

II)将ADA标记的BSA溶液加入步骤I)所得混合溶液中继续于室温下振荡反应28～32min；

III)将步骤II)所得溶液在3～5℃条件下于8000～10000rpm离心18～22min，得到沉淀物，

所述沉淀物复溶于0.01M pH7.4的PBS中，得到用ADA标记的BSA封闭的金标抗体。

5.权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述的ADA标记的BSA通过以下方法制备：

配制浓度为0.8～1.2mg/mL的金刚烷胺溶液，向溶液中分别加入N-羟基丁二酰亚胺溶液和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐溶液，使N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐的重量比在1:1.5～2.5，于室温避光反应60min完成活化；将活化后的溶液与含BSA浓度为3.0mg/mL的碳酸氢钠溶液混合，于室温避光反应12h；反应完毕后透析去除游离的金刚烷胺，即得到ADA标记的BSA。