[发明专利]去除皮肤中黑色素的功能肽的制备方法

说明书

本发明公开了去除皮肤中黑色素的功能肽的制备方法，其具体步骤为：将蚕茧壳加入碳酸钠溶液中脱胶，然后加入氯化钙溶液中盐溶得丝素溶液，加入碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，离心，浓缩得功能肽粗液，然后依次用凝胶柱层析、离子交换树脂层析、高效液相色谱纯化，即得功能肽。有益效果为：本发明制备方法简单可行，功能肽的得率高、纯度高、活性不被破坏，分离方法简单，可快速高效地分离出功能肽，得到的功能肽去黑色素效果好、具有保水性。

技术领域

本发明涉及多肽提取技术领域，尤其是涉及去除皮肤中黑色素的功能肽的制备方法。

背景技术

蚕丝是一种长蛋白纤维，质地柔软，其织物如丝绸穿着舒适，且具有华丽的光泽，在其开发利用的几千年历史中，蚕丝主要被用作服饰用品，倍受欢迎，长久以来一直处于供不应求的状态。到20年代末，蚕丝行业首次出现全球性生产相对过剩。蚕丝业发达的日本为维护其蚕丝生产的国际地位并促进本国蚕丝业的健康良性发展，从1933年起，农林省蚕丝试验场将对蚕茧新用途的研究列入了政府预算，开始了蚕茧新用途的开发及研究。蚕丝中的蛋白含量高达97.6%-98.5%，其结构主要由两条丝素（Fibroin）和周转覆盖的丝胶（Sericin）两部分组成，丝素肽属于丝素水解的中间产物。由于蚕丝蛋白具有良好的吸湿性与保湿性，与皮肤中的角元蛋白有良好的亲和性，因而有助于调节皮肤水份。同时，蚕丝蛋白还具有吸收紫外线的作用，可防止太阳辐射。因此针对蚕丝蛋白这些功能，日本在70年代开始开发利用丝素粉并用于粉底材料。有关丝素用作化妆品的最佳分子量范围，在80年代初，日本已有相关资料记载。当采用一定浓度的硫酸将丝素水解后，用碱中和制得的分子量在300-800kDa的丝素肽，将它与中性盐制备的分子量在1000-3000kDa的肽混合使用时，可以增加毛发的自然光泽，提高毛发的弹性，并对皮肤起到保湿的作用。当丝素被降解为分子量在1000-6000kDa范围间时，它不但容易透过人体的表皮细胞膜被皮肤吸收，而且对减少皮肤局部细微皱纹和抑制黑色素也有一定作用。但是对丝素肽中能够去除皮肤中黑色素的功能肽研究较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备方法简单可行，功能肽的得率高、纯度高、活性不被破坏，分离方法简单，可快速高效地分离出功能肽，得到的功能肽去黑色素效果好、具有保水性的去除皮肤中黑色素的功能肽的制备方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

去除皮肤中黑色素的功能肽的制备方法，包括脱胶、丝素溶液制备、丝素蛋白酶解、凝胶柱层析、离子交换树脂层析、高效液相色谱纯化，其具体步骤为：

脱胶：将蚕茧壳按料液比为1:30-40（g/mL）加入浓度为0.3-0.7%的碳酸钠溶液中，脱胶30-40min，然后用蒸馏水将脱胶的蚕茧壳清洗干净，在70-90℃下烘干，即得脱胶蚕茧壳，丝素结构紧密，结晶度高，不溶于水，但能被盐溶液溶解，而丝胶分子中极性基团稍多，无定形部分比例较高，因而亲水性较强，能与水形成均匀的胶溶体，该步骤可将包围在丝素周围的丝胶去除，从而得到更单一、高纯的丝素酶解物，能增大丝素直接和酶作用的接触面积；

丝素溶液制备：将脱胶蚕茧壳加入浓度为8-12%的氯化钙溶液中，在95-100℃下盐溶2-5min，冷却后调节丝素溶液浓度为40-60g/L，备用；