[发明专利]一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒

权利要求书

1.一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，包括膀胱癌突变基因多重PCR特异性引物和接头元件，所述膀胱癌突变基因多重PCR特异性引物包括上游特异性引物组1、上游特异性引物组2和接头元件通用引物,用于对待测样品中多个目标区域进行扩增，所述上游特异性引物组1的核酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.32所示，所述上游特异性引物组2的核酸序列如SEQ ID NO.33-SEQ ID NO.64所示，所述接头元件用于与待测样品的核酸片段连接构建高通量测序文库。

2.根据权利要求1所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶混合物、质控品和无核酸酶水。

3.根据权利要求1所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述待测样品的核酸片段与所述接头元件连接之前先进行去磷酸化处理，去除5’端磷酸基团。

4.根据权利要求2所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述膀胱癌突变基因有多个，与每个目标区域对应的一对特异性引物均能够与目标区域上游部分互补，所述上游特异性引物组2相比所述上游特异性引物组1更靠近对应的扩增目标位点，所述上游特异性引物组1与所述接头元件通用引物配合，用于对待测样品和接头元件的连接产物进行扩增，得到特异性扩增产物1，所述上游特异性引物组2与所述接头元件通用引物配合，用于对所述特异性扩增产物1进行扩增，得到特异性扩增产物2。

5.根据权利要求1所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述上游特异性引物组2的5’端均含有用于高通量测序的接头元件序列。

6.根据权利要求4所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述接头元件通用引物还用于对所述特异性扩增产物2进行扩增，以得到可以用于高通量测序的文库。

7.根据权利要求1所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述接头元件中包含第一标签序列和第二标签序列，所述第一标签序列用于在扩增目标区域过程中，对不同待测样品的扩增产物上做上相应的标记，所述第二标签序列用于为DNA模板连接barcode进行测序后数据分析。

8.根据权利要求1所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述膀胱癌突变基因包括PIK3CB、PIK3CA、FBXW7、FGFR3、NFE2L2、SF3B1、NRAS、EIF2AK3、TERT、CDKN1A、PRKAA1、ARID1A、APC、EGFR、ELF3、CTNNB1、ACTB、mTOR、IDH1。

9.根据权利要求8所述的一种基于高通量测序技术检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，所述ACTB的特异性引物为SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.58；所述APC的特异性引物为SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.49；所述ARID1A的特异性引物为SEQID NO.16和SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.55；所述CDKN1A的特异性引物为SEQID NO.13和SEQ ID NO. 45、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.61；所述CTNNB1的特异性引物为SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.52；所述EGFR的特异性引物为SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.60；所述EIF2AK3的特异性引物为SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.41；所述ELF3的特异性引物为SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.51；所述FBXW7的特异性引物为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.42，所述FGFR3的特异性引物为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.24和SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.30和SEQ ID NO.52；所述IDH1的特异性引物为SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.63；所述mTOR的特异性引物为SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.32和SEQ ID NO.64；所述NFE2L2的特异性引物为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.54；所述NRAS的特异性引物为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.46；所述PIK3CA的特异性引物为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.40、SEQID NO.11和SEQ ID NO.43；所述PIK3CB的特异性引物为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.33；所述PRKAA1的特异性引物为SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.47；所述SF3B1的特异性引物为SEQ IDNO.6和SEQ ID NO.38；所述TERT的特异性引物为SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.44。