[发明专利]一种融合蛋白及治疗非小细胞肺癌的重组病毒疫苗和制备方法

说明书

本发明提供了一种融合蛋白及治疗非小细胞肺癌的病毒疫苗和制备方法，本发明属于疫苗技术领域。本发明提供了一种融合蛋白，包括黏蛋白1(MUC1)抗原元件和黑素瘤抗原家族A3(MAGE‑A3)抗原元件和位于黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件之间的连接肽；所述连接肽的氨基酸个数为0～20个。所述融合蛋白具有两者的生物学功能，既具有黏蛋白1的免疫原性，又具有黑素瘤抗原家族A3的免疫原性，且所述融合蛋白质可以在两种抗原元件的协同下增强抗肿瘤的效果，维持周期长，免疫宿主广泛，不需要添加佐剂为抗肿瘤等治疗提供新方向。

技术领域

本发明属于疫苗技术领域，具体涉及一种融合蛋白及治疗非小细胞肺癌的病毒疫苗和制备方法。

背景技术

非小细胞肺癌，属于肺癌的一种，它包括鳞癌、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比，其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占肺癌总敉的80～85％。临床上非小细胞肺癌的症状表现发热、胸痛、气促、咳嗽、血痰等。很多人都会因为不了解该病初始症状的具体情况而出现误诊，尤其是咳嗽，该症状主要是由于肺部的恶性肿瘤细胞，也即癌细胞持续的刺激患者的呼吸道引发的。

目前，手术、化疗、放疗等传统疗法对于早期非小细胞肺癌具有一定的疗效，但一方面化疗、放疗具有较大的副作用，另一方面由于许多肿瘤发现较晚，往往失去手术治疗的最佳机会，所以通过增强机体免疫系统的抗肿瘤作用杀灭肿瘤细胞、达到治疗肿瘤目的的免疫与基因疗法作为肿瘤治疗的一种新模式，成为肿瘤治疗和免疫学研究的热点。

MAGE基因的表达产物中MAGE-3蛋白是肿瘤特异性抗原的典型代表。MAGE-3是广泛存在于多种肿瘤的肿瘤特异性抗原，在正常组织中除了胎盘和睾丸低水平表达外，在其他正常成熟组织均不表达，而睾丸是免疫豁免器官，所以，MAGE-3是一种理想的肿瘤相关抗原，可以作为多种肿瘤免疫治疗的靶点。但是MAGE-3作为非小细胞肺癌抗原制备疫苗，由于抗原肽的表位有限，不能包括所有的免疫位点、人工合成的抗原肽的空间结构可能与自然产生的抗原空间结构不同，妨碍产生正常的免疫反应或存在免疫性较低的问题，大大影响免疫治疗。

尽管现有技术中常常采用两种细胞抗原融合得到融合蛋白，但是融合蛋白在体外致敏DC的效率一般较低，DC在摄取分子肽后，往往不能有效递呈抗原并激发特异性的CTL，因此如何增强DC对抗原的加工递呈，以期更有效地激发肿瘤抗原特异性的免疫应答仍然是肿瘤免疫治疗研究中亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种融合蛋白及治疗非小细胞肺癌的重组病毒疫苗和制备方法，使所述融合蛋白具有较强的免疫性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种融合蛋白，包括黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件；所述黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件之间还包括连接肽；所述连接肽的氨基酸个数为0～20个。

优选的，所述黏蛋白1抗原元件具有如序列表中SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；所述黑素瘤抗原家族A3抗原元件具有如序列表中SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；

所述连接肽具有如序列表中SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

优选的，所述融合蛋白具有如序列表中SEQ ID No.4或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。

本发明提供了一种融合蛋白的编码基因，编码所述的融合蛋白。

优选的，所述编码基因具有如序列表中SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或具有如序列表中SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列。

本发明提供了一种治疗非小细胞肺癌的重组病毒疫苗的构建方法，包括以下步骤：

1)将所述的编码基因克隆到穿梭质粒中，得到重组穿梭质粒；