[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测方法及其专用检测卡

说明书

本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测方法及其专用检测卡。本发明采用荧光微球代替胶体金作为标记探针，制备了免疫荧光侧流层析试纸条，灵敏度较胶体金试纸条技术提升10倍以上。本发明提供的检测技术，既具备ELISA技术的高灵敏度优势，又具备胶体金试纸条技术的现场检测优势，利用便携式荧光免疫分析仪15min就能定量的检测出抗体滴度，现场进行不需要专业的培训和技能，测试操作方便，快速提供结果。本发明能切实解决目前猪繁殖与呼吸综合征疫情的检测及防控需求。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测方法及其专用检测卡。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一种以感染猪发热、厌食，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。该病于1987年最早发现于美国。1991年荷兰人Wensvoot等首次从发病仔猪和母猪体内分离到了该病毒，当时称为Lelystad病毒。随后德国、美国、英国等国家和地区也分离到了该病毒。目前，该病已遍及北美洲及欧洲，在全球范围内传播。郭宝清等(1996)首次从国内疑似PRRS感染猪群中分离出PRRSV，从而证实了本病在我国的存在。随后，在2006年我国爆发高致病性PRRS，所有年龄段的猪均易感染，表现为高烧(41℃)，患病率高达(50-100％)和高死亡率高达(20-100％)。该病传播速度快，导致大量猪被扑杀，给养猪业造成巨大的经济损失。因此，我们迫切需要一种高敏感性、特异性，并且可实现现场快速筛查的检测技术，用于防控疫情发生和疫苗接种后的免疫评价。

猪繁殖与呼吸综合征病毒是单股正链RNA病毒，长达15kb，包含有5‘端帽状结构和3′pol y(A)尾，含9个大部分首尾连接和重叠的半开放阅读框，简称ORFs(ORFs：ORF1a/1b，ORF2a/2b，and ORF3-7)，至少编码14个非结构蛋白和8个结构蛋白(Gp2/E，Gp3，Gp4，Gp5/5a，M，and N)。根据病毒的抗原性，基因组及致病性的差异，PRRSV可分为2个型，即欧洲型(LV株为代表株)和美洲型(ATCC-VR2332株为代表株)，两种毒株间氨基酸的同源性为78％～81％。在我国分离的PRRSV主要是北美型。

实验室检测PRRSV抗体技术有很多，包括中和试验，免疫过氧化酶单层试验(IPMAs)，免疫荧光检测(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。然而这些技术需要专业实验室，精密仪器，训练有素的专业技术人员，而且耗时较长，无法用于现场快速检测，不能满足现场筛查的需求。免疫层析技术开始于1980年代，可以准确、快速检测生物标记物如抗原、抗体、蛋白质。目前以胶体金颗粒作为标记标签，制备的胶体金试纸条已经被广泛应用于各个领域，该技术具有检测快捷，可实现现场快速检测的目的。但是由于灵敏度偏低，而且该技术不能像ELISA技术那样对待检样品进行定量，限制了其应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测方法及其专用检测卡。

本发明一种检测卡，包括底板、样品垫、标记垫、检测垫和吸水垫；

沿待测液体样本流动方向，样品垫、标记垫、检测垫和吸水垫依次固定于底板上；

标记垫上包被有荧光微球标记的一抗；

检测垫上设置有检测线和质控线，检测线上包被有抗原蛋白A和抗原蛋白B，质控线上包被有二抗；

所述一抗为抗猪IgG抗体；

所述二抗为抗所述一抗的抗体；

所述抗原蛋白A为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：