[发明专利]用于检测大豆DNA的特异性引物和探针及实时荧光定量PCR试剂盒

权利要求书

1.用于检测大豆DNA的特异性引物和探针，其特征在于：所述探针序列为：5’-AACCCTATCCTCACCCACTCG-3’；

所述特异性引物为下述序列或为下述序列的互补链序列：

上游引物序列为5’-CGATGTGGTCGATTTGAAGA-3’；

下游引物序列为5’-AAAGCACGTCATGCGATTC-3’。

2.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于：探针中5’端标记的荧光报告基团为FAM、TET、JOE、HEX、VIC中的一种，3’端标记的荧光淬灭基团为TAMRA、DABCYL、BHQ中的一种。

3.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物为向5’端和3’端方向延伸一至数个碱基或删减一至数个碱基得到的序列。

4.一种用于检测大豆DNA的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCR试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的特异性引物和探针。

5.根据权利要求4所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：在10μl PCR反应体系中，所述上游引物的用量为0.1μl，所述下游引物的用量为0.1μl，所述探针的用量为0.2μl。

6.根据权利要求4或5所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCR试剂盒还包括系列浓度标准品和阳性对照；所述系列浓度标准品是将大豆Lectin rDNA基因与载体连接，转化至感受态细胞中诱导表达，提取重组质粒，将重组质粒定量后稀释，得到系列浓度标准品。

7.根据权利要求6所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述标准品的核苷酸序列为序列表中序列1。

8.权利要求1-3任一所述的特异性引物和探针、权利要求4-7任一所述的实时荧光定量PCR试剂盒在如下任一中的应用：

(1)定性或定量检测或辅助检测大豆；

(2)制备定性或定量检测或辅助检测大豆的产品；

(3)定性或定量检测或辅助检测植物油中是否含有大豆油；

(4)制备定性或定量检测或辅助检测植物油中是否含有大豆油的产品。

9.一种检测或辅助检测植物油中是否含有大豆油的方法，其特征在于：分别以系列浓度标准品和待测样品DNA为模板，利用特异性引物和探针进行实时荧光定量PCR，绘制标准曲线，通过标准曲线和待测样品的Ct值判定结果；作为优选，所述待测样品DNA采用冷冻干燥法提取。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应条件为：94℃预变性2分钟，94℃15秒、60℃40s并收集荧光信号，40个循环。