[发明专利]一种pMKRN1基因敲除的猪体细胞及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201810129782.7 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108373997B | 公开（公告）日： | 2020-10-27 |
| 发明（设计）人： | 黄勇;童德文;王彤彤 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N9/22;C12N7/00 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 范巍 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 pmkrn1 基因 体细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种基因敲除细胞，其特征在于：该细胞为pMKRN1基因敲除的猪体细胞，所述猪体细胞是利用CRISPR/Cas9系统完成基因敲除的，所述CRISPR/Cas9系统用于靶向pMKRN1基因的gRNA的序列如SEQ.ID.NO.5及SEQ.ID.NO.6所示。
2.根据权利要求1所述一种基因敲除细胞，其特征在于：所述猪体细胞选自pMKRN1基因敲除的PK-15细胞。
3.根据权利要求1所述一种基因敲除细胞，其特征在于：PCV2病毒在所述猪体细胞内不被泛素化蛋白酶体途径所降解。
4.一种如权利要求1所述的基因敲除细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)制备CRISPR/Cas9系统靶向pMKRN1基因的gRNA，所述CRISPR/Cas9系统用于靶向pMKRN1基因的gRNA的序列如SEQ.ID.NO.5及SEQ.ID.NO.6所示；
2)利用gRNA构建重组慢病毒载体，然后包装为重组慢病毒；
3)将重组慢病毒感染猪体细胞，然后筛选感染的阳性细胞克隆；
4)通过对所述细胞克隆进行鉴定，得到pMKRN1敲除的猪体细胞。
5.一种如权利要求1所述的基因敲除细胞在制备PCV2病毒中的应用。
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