[发明专利]一种梭子蟹蛋白粉及其用途

说明书

本发明公开了一种梭子蟹蛋白粉，其制备方法包括：预处理、分离、提取、纯化，首先将梭子蟹肉组织加入裂解液中研磨匀浆，离心后浓缩，加入丙酮脱脂，去除丙酮后加入PBS搅拌、离心，收集上清即得梭子蟹粗蛋白液，然后以梯度硫酸铵对梭子蟹粗蛋白液进行分段盐析，经柱层析、透析和浓缩后即得梭子蟹蛋白粉。本发明还公开了梭子蟹蛋白粉用于诊断临床梭子蟹螯过敏性疾病的应用。有益效果为：梭子蟹蛋白粉组分较完整，分子量跨度大，免疫活性强，与血清特异性免疫球蛋白结合更强，更适合应用于临床诊断梭子蟹螯过敏性疾病，而且在梭子蟹蛋白粉的制备过程可大大降低蛋白质变性，使蛋白质浓缩液经超低温冷冻后依然保存原有的蛋白活性。

技术领域

本发明涉及梭子蟹深加工领域，尤其是涉及一种梭子蟹蛋白粉及其用途。

技术背景

梭子蟹，有些地方俗称“白蟹”。因头胸甲呈梭子形，故名梭子。甲壳的中央有三个突起，所以又称“三疣梭子蟹”，属于节肢动物。雄性脐尖而光滑，螯长大，壳面带青色；雌性脐圆有绒毛，壳面呈赭色，或有斑点。梭子蟹肉肥味美，有较高的营养价值和经济价值，且适宜于海水暂养增肥。头胸甲梭形，宽几乎为长的2倍；头胸甲表面覆盖有细小的颗粒，具2条颗粒横向隆堤及3个疣状突起；额具2只锐齿；前侧缘具9只锐齿，末齿长刺状，向外突出。螯脚粗壮，长度较头胸甲宽长；长节棱柱形，雄性长节较修长，前缘具4锐棘。研究显示，存在于甲壳类动物中的过敏原有原肌球蛋白、球蛋白轻链、精氨酸激酶、肌钙蛋白C等，不同种类的甲壳类动物过敏组分不同。此外，不同个体间对同一过敏食物的反应存在异质性，可能导致漏检。因此，为提高临床诊断梭子蟹螯蟹过敏原的灵敏度和特异度及脱敏治疗的效果，需要制备组分全、免疫活性好的过敏原溶液，开发适合我国人群的过敏性疾病诊断试剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种梭子蟹蛋白粉及其用途，梭子蟹蛋白粉组分较完整，分子量跨度大，免疫活性强，与血清特异性免疫球蛋白结合更强，更适合应用于临床诊断梭子蟹螯过敏性疾病，而且在梭子蟹蛋白粉的制备过程可大大降低蛋白质变性，使蛋白质浓缩液经超低温冷冻后依然保存原有的蛋白活性。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种梭子蟹蛋白粉，其制备方法包括：预处理、分离、提取、纯化，具体包括以下步骤：

预处理：在液氮环境中，将梭子蟹肉组织按料液比1：6-8加入裂解液中并研磨均匀，再用电动匀浆器匀浆30-60秒，0-4℃冰箱静置1-2小时，于10000-13000r/min、0-4℃条件下离心60-90分钟，收集上清，过滤后浓缩至30-35%分装至-60～-80℃保存，备用；将梭子蟹肉组织加入裂解液中并充分研磨匀浆，可以将梭子蟹肉组织中的蛋白质与糖类、脂肪类初步分离，并将杂质剔除，为进一步的提取小黄鱼蛋白质做好准备；

分离：将初步提取浓缩液解冻，按照体积比1∶12-15加入丙酮，置0-1℃冰箱脱脂24-48小时，期间换液1次，搅拌2-4小时，后滤去丙酮，干燥后称重，每克样品加15-17mlPBS，1-4℃静置48-72小时，每12小时搅拌1-2小时，然后置于1-4℃、12000-15000r/min条件下离心20-30分钟，收集上清即得梭子蟹粗蛋白液，置于-35～-40℃保存；通过丙酮脱脂，可大大降低粗蛋白液中的脂肪酸含量，同时以PBS溶解可除去浓缩液中的糖类，提高粗蛋白液中的蛋白质含量；

提取：依次用30%、50%、70%、90%饱和度的硫酸铵对梭子蟹粗蛋白液进行分段盐析，具体方法为：在搅拌下缓慢加入硫酸铵，使其达到所需饱和度，再缓慢搅拌1-1.5小时，1-2℃静置2-3小时，然后置于1-4℃、12000-15000r/min条件下离心20-30分钟，收集沉淀溶于PBS，对梭子蟹粗蛋白液重复上述步骤，得到其余饱和度的硫酸铵沉淀组分；以不同梯度浓度的硫酸铵沉淀可以析出各饱和度状态下的蛋白质，不仅可以防止蛋白质的流失，还可以大大提高蛋白质的得率与纯度；