[发明专利]一种梭子蟹蛋白粉及其用途在审
| 申请号： | 201810129448.1 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108178779A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 叶常青;谢超 | 申请（专利权）人： | 舟山海研食品科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/36;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京华识知识产权代理有限公司 11530 | 代理人： | 赵永强 |
| 地址： | 316100 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 梭子蟹 蛋白粉 过敏性疾病 粗蛋白液 特异性免疫球蛋白 硫酸铵 预处理 浓缩 超低温冷冻 蛋白质变性 蛋白质浓缩 丙酮脱脂 蛋白活性 分段盐析 临床诊断 免疫活性 制备过程 研磨 裂解液 原有的 柱层析 血清 丙酮 透析 匀浆 去除 制备 应用 跨度 诊断 保存 | ||
1.一种梭子蟹蛋白粉，其制备方法包括：预处理、分离、提取、纯化，其特征在于：所述预处理步骤为：在液氮环境中，将梭子蟹肉组织按料液比1:6-8加入裂解液中并研磨均匀，再用电动匀浆器匀浆30-60秒，0-4℃冰箱静置1-2小时，于10000-13000r/min、0-4℃条件下离心60-90分钟，收集上清，过滤后浓缩至30-35%分装至-60～-80℃保存，备用。
2. 根据权利要求1所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述预处理步骤中，裂解液为7-8mol/L尿素、2-3mol/L硫脲、4-5%CHAPS、40-45mmol/L Tris、3-4mmol/L 4-乙基苯甲酸、0.3-0.5mmol/L L-赤藓糖，余量为去离子水，使用前加入45-65mmol/L DTT。
3.根据权利要求1所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述分离步骤为：将初步提取浓缩液解冻，按照体积比1:12-15加入丙酮，置0-1℃冰箱脱脂24-48小时，期间换液1次，搅拌2-4小时，后滤去丙酮，干燥后称重，每克样品加15-17mlPBS，1-4℃静置48-72小时，每12小时搅拌1-2小时，离心后收集上清即得梭子蟹粗蛋白液，置于-35～-40℃保存。
4.根据权利要求3所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述分离步骤中，离心的温度为1-4℃，转速为12000-15000r/min，离心时间为20-30分钟。
5.根据权利要求1所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述提取步骤为：依次用30%、50%、70%、90%饱和度的硫酸铵对梭子蟹粗蛋白液进行分段盐析，具体方法为：在搅拌下缓慢加入硫酸铵，使其达到所需饱和度，再缓慢搅拌1-1.5小时，1-2℃静置2-3小时，离心后收集沉淀溶于PBS，对梭子蟹粗蛋白液重复上述步骤，得到其余饱和度的硫酸铵沉淀组分。
6.根据权利要求5所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述提取步骤中，离心的温度为1-4℃，转速为12000-15000r/min，离心时间为20-30分钟。
7. 根据权利要求1所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述纯化步骤为：纤维素预处理后装柱，柱尺寸为1.0cm×40.0cm，以0.01-0.015mol/L Tris-HCl缓冲液充分平衡，将硫酸铵沉淀组分上样，以2倍柱床体积的相同缓冲液洗柱，再用NaCl溶液＆Tris-HCl溶液梯度洗脱，调节流速为1.5-2.5mL/min，在210、280 nm下测定其紫外吸收，并收集各洗脱峰组分，用PBS充分透析和浓缩后即得梭子蟹蛋白粉，置于-35～-45℃保存。
8.根据权利要求9所述的一种梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述纯化步骤中，洗脱液溶液NaCl溶液的浓度梯度为0.1-0.5mol/L，Tris-HCl溶液的浓度梯度为0.01-0.015mol/L。
9.一种梭子蟹蛋白粉的用途，其特征在于：所述梭子蟹蛋白粉可通过与血清特异性免疫球蛋白结合，用于诊断临床梭子蟹螯过敏性疾病。
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