[发明专利]一种新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法

说明书

本发明公开了一种新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法。它包括如下步骤：1)取新疆一枝蒿不同组织器官的干粉末，分别用有机溶剂提取、超声、离心、浓缩，得到浓缩物，然后将浓缩物进行复溶、超声、离心、过滤，取不同组织器官的代谢组的上清液；2)将不同组织器官的代谢组的上清液采用液相色谱‑串联质谱法进行测定，对得到的数据进行处理；然后采用多变量统计分析得到差异变量，根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据，结合代谢物数据库Metlin检索对比分析，即得到新疆一枝蒿不同组织器官的植物代谢组的差异。本发明方法样品前处理操作简便，分析方法稳定性好、灵敏度高、代谢物覆盖范围宽，可高效、全面地获取该植物的代谢组信息。

技术领域

本发明涉及一种新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法，具体涉及一种基于液相色谱-串联质谱联用技术的新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法，属于植物代谢组学分析领域。

背景技术

从药用植物中寻找活性物质、发现新的药源分子一直是新药研究的重要内容。药用植物物种多样，所含化学成分种类繁多，为新药研发提供了丰富资源。然而，传统的药用植物药效成分研究方法难以全面地反映化学成分及其体内分布，生态环境对其体内物质的影响。植物代谢组学研究是从整体出发，系统地分析植物中的所有小分子物质及其随时间、环境的变化，有利于药用植物物质基础及其功能的阐明、物种的判断及预测等。目前，代谢组学研究中常用的分析工具主要是以核磁共振波谱(Nuclear magnetic resonance,NMR)和质谱(Mass spectrometry,MS)技术为核心的分析手段及其与色谱的联用技术，其中液相色谱-串联质谱联用技术(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)具有高灵敏、高通量、特异性强的特点，能够用于高效、快速、准确地研究植物内源性代谢物的动态变化信息，为阐明药用植物复杂代谢体系提供分子依据，从而已经成为重要的分析手段。

新疆一枝蒿植物(Artemisia rupestris L.)为菊科蒿属、多年生草本植物，主要分布在我国新疆天山、阿尔泰等地区，全草入药。作为新疆维吾尔医学的传统用药，新疆一枝蒿具有抗炎、保肝、抗过敏、抗病毒、抑菌、抗肿瘤等多方面的药效作用，有较高的药用价值。新疆一枝蒿中化学成分种类繁多，含有黄酮类、生物碱类、倍半萜类、多糖类等。文献报道该植物中黄酮类和倍半萜类化合物是含量较为丰富的活性成分，例如倍半萜类次生代谢物一枝蒿酮酸是代表性的特征有效成分。新疆一枝蒿药材资源多依靠野生采挖，由于该植物具有独特的生态特性，自然繁殖极为困难，并且近年来被大量开发利用，加上矿山开采、过度放牧等原因，野生药材资源已经匮乏，因而新疆一枝蒿的引种、驯化、人工栽培研究得到了重视，并在临床上采用人工栽培品种代替野生品种使用。然而，人工栽培品种与野生品种的药效物质基础是否一致尚存争议。目前，新疆一枝蒿的药效物质基础研究主要包括化学成分的分离鉴定、有效成分的含量测定、质量标准分析等。但这些研究多采用传统分析方法，分离提取过程耗时，分析通量有限，且仅针对少数几个化合物，无法高效、系统、全面地表征新疆一枝蒿的药效物质基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于液相色谱-串联质谱联用技术的新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法，本发明建立了基于LC-MS/MS技术的新疆一枝蒿植物代谢组学分析方法，该方法样品前处理操作简便，分析方法稳定性好、灵敏度高、代谢物覆盖范围宽，可高效、全面地获取该植物的代谢组信息。

本发明提供的一种新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法，包括如下步骤：1)取新疆一枝蒿不同组织器官的干粉末，分别用有机溶剂提取、超声、离心、浓缩，得到浓缩物，然后将所述浓缩物进行复溶、所述超声、所述离心、过滤，取不同组织器官的代谢组的上清液；

2)将所述不同组织器官的代谢组的上清液采用液相色谱-串联质谱法进行测定，对得到的数据进行处理；然后采用多变量统计分析得到差异变量，根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据，结合代谢物数据库Metlin检索对比分析，即得到新疆一枝蒿不同组织器官的植物代谢组的差异。