[发明专利]一种新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法有效
申请号: | 201810128472.3 | 申请日: | 2018-02-08 |
公开(公告)号: | CN108333270B | 公开(公告)日: | 2020-11-03 |
发明(设计)人: | 王中华;陈路路;周帜;何秉淑;再帕尔·阿不力孜 | 申请(专利权)人: | 中央民族大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;王春霞 |
地址: | 100081 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 新疆 一枝蒿 植物 代谢 分析 方法 | ||
1.一种新疆一枝蒿植物代谢组学的分析方法,包括如下步骤:1)取新疆一枝蒿不同组织器官的干粉末,分别用有机溶剂提取、超声、离心、浓缩,得到浓缩物,然后将所述浓缩物进行复溶、所述超声、所述离心、过滤,取不同组织器官的代谢组的上清液;
所述不同组织器官为根、茎、枝、叶和花中的至少一种;
所述有机溶剂为体积比为80:20的甲醇-水和/或60:20:20的甲醇-氯仿-水;
进行所述复溶之前所述超声的时间为1~30min;
所述复溶的溶剂为乙腈-水,所述乙腈与所述水的体积比为50:50;
2)将所述不同组织器官的代谢组的上清液采用液相色谱-串联质谱法进行测定,对得到的数据进行处理;然后采用多变量统计分析得到差异变量,根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据,结合代谢物数据库Metlin检索对比分析,即得到新疆一枝蒿不同组织器官的植物代谢组的差异;
所述液相色谱条件如下:Acquity UPLC HSS T3色谱柱;含体积百分含量为0.1%的甲酸的水A和含体积百分含量为0.1%甲酸的乙腈B为流动相;流速为0.3mL/min,进样量为5μL,柱温为40℃;洗脱梯度为:每次进样前用初始流动相平衡8min,0~20min,5%→50%B;20~27min,50%→98%B;27~30min,98%B;30~30.1min,98%→5%B;上述百分含量均为体积百分含量;
所述质谱条件如下:
离子源为电喷雾源;采用正、负离子检测模式;扫描模式为全扫描;扫描范围:m/z150~1000;分辨率:60000;喷雾电压:3.5KV,-3KV;鞘气:0.24MPa;辅助气:0.10MPa;离子源温度:正离子模式为350℃,负离子模式为380℃。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述有机溶剂提取的转速为10000~30000r/min;进行所述复溶之前所述离心的转速为10000~15000r/min;
进行所述复溶之后所述超声的时间为1~30min,所述离心的转速为10000~15000r/min。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:进行所述复溶之前所述超声的时间为10min;
所述有机溶剂提取的转速为25000r/min;进行所述复溶之前所述离心的转速为13500r/min;
进行所述复溶之后所述超声的时间为10min,所述离心的转速为13500r/min。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:所述多变量统计分析的方法包括主成分分析和正交偏最小二乘判别分析对样品进行模式识别,选择对分组贡献较大的变量。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:在所述多变量统计分析之后还包括采用带有jack-knifed置信区间的载荷图及原始轮廓图进行筛选去除变异较大、组间交差严重的变量,对两组独立样本进行t检验,选择P0.05的变量的步骤。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:在所述多变量统计分析之后还包括采用Pearson相关性分析筛除加合离子、同位素离子及碎片离子,获得差异变量。
7.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于:步骤(2)中数据处理后得到质荷比、保留时间及其峰面积的二维数据阵。
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