[发明专利]一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒在审
| 申请号： | 201810127377.1 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108333351A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 朵红;付永;何轶群;沈秀英;郭志宏;彭毛;李伟 | 申请（专利权）人： | 青海省畜牧兽医科学院 |
| 主分类号： | G01N33/558 | 分类号： | G01N33/558;G01N33/535 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 810016 青海*** | 国省代码： | 青海;63 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细粒棘球蚴病 抗体检测试剂盒 原核表达载体 重组抗原 抗体 离心收集菌体 预包被酶标板 大肠杆菌 底物显色液 细菌裂解液 阳性对照液 样品稀释液 阴性对照液 超声破碎 定性检测 基因cDNA 检测试剂 抗原来源 离心收集 酶结合物 重组蛋白 灵敏度 洗涤液 终止液 构建 制备 溶解 克隆 基因 检测 | ||
1.一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：所述检测试剂盒包括EgAgB8/2重组抗原预包被酶标板、样品稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶结合物、洗涤液、底物显色液和终止液。
2.根据权利要求1所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：所述EgAgB8/2重组抗原是通过以下方法制备的：首先用RT-PCR扩增EgAgB8/2基因 cDNA，克隆EgAgB8/2 基因，构建原核表达载体pET-EgAgB8/2，并在大肠杆菌 BL21(DE3)中表达，用IPTG诱导原核表达载体表达，离心收集菌体，用细菌裂解液溶解后超声破碎，离心收集上清，用 Ni-NTA胶进行纯化。
3.根据权利要求2所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：将纯化的EgAgB8/2重组蛋白用pH 8-10的碳酸盐缓冲液稀释至3-8ug/ml，包被酶标板,每孔60-120 ul/孔，3-8℃过夜,用洗涤液洗2-5次，每次3-5min，甩干，加入含2-8%脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液，每孔100-300ul/孔，并置于30-40℃温箱内封闭0.5-1.5h，取出甩干，洗涤液洗涤2-5次，每次2-5min，甩干，真空包装后置于4℃保存备用。
4.根据权利要求1至3任意一项所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于所述样品稀释液为含0.02%-0.08% Tween-20磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1至3任意一项所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：阴性对照液为健康未患棘球蚴病的羊的血清，所述阳性对照液为确诊有棘球蚴感染的羊的血清。
6.根据权利要求1至3任意一项所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：所述酶结合物为辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG。
7.根据权利要求1至3任意一项所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：所述洗洗涤液为含0.02%-0.08%Tween-20磷酸盐缓冲液。
8. 根据权利要求1至3任意一项所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：底物显色液包括A溶液和B溶液,A溶液的配方为：每500ml含醋酸钠10-15g、柠檬酸1-2 g和30%双氧水0.1-0.5ml；溶液B的配方为：每500ml含乙二胺四乙酸二钠0.1-0.5g、柠檬酸0.5-1.5g、甘油30-70ml和TMB粉末0.1-0.2g。
9.根据权利要求1至3任意一项所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于：所述终止液为1-3mol/L的硫酸溶液。
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