[发明专利]一种高表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株及应用

权利要求书

1.一种高表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌，所述的工程菌为：毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115-syn-Man，保藏编号：CCTCC NO：M2017827。

2.权利要求1所述的毕赤酵母工程菌在生产β-甘露聚糖酶中的应用。

3.权利要求1所述的毕赤酵母工程菌的发酵方法，包括下述步骤：

1）.种子液培养阶段

将毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115-syn-Man用YPD液体培养基活化后转接至YPG培养基中培养16-25h，25-32℃，220-300 r/min；

2）.菌体生长阶段

把1 L种子液接种到装有20-30 L BSM培养基的发酵罐中；在发酵起始阶段设置转速250-350 r/min，通气率0.55-0.80 vvm，pH 4.5-5.5.0，DO>30％直到升至100%，当BSM培养基中的甘油消耗完且DO降低后又急剧上升时，进入连续补甘油阶段，加入50%甘油共4 -5L；随着菌体生物量的增加，溶氧DO迅速下降，此时需要根据DO值不断提高转速和增加罐压，保持DO 值在在20%-40%的范围内；

所述的50%甘油含有1.2%的PTM1；

3）.甲醇诱导表达阶段

补加甘油结束后，当DO值再次急剧上升时就进入甲醇诱导阶段，甲醇诱导开始时设置搅拌速度450-550 r/min，通气率维持在1.5-2.5 vvm，甲醇添加量为0.8-1.5 mL/（h·L）；逐渐增加甲醇添加量，使DO值稳定在30%~50%之间，并保持该速率至发酵结束；

所述的甲醇含有1.2%的PTM1。