[发明专利]一种外泌体的制备方法以及由该方法制备的外泌体和用途

说明书

本发明提供了一种外泌体的制备方法以及由该方法制备的外泌体及其用途。所述方法包括以下步骤：1)采集人脂肪组织，并提取得到脂肪干细胞：2)对步骤1)中得到的脂肪干细胞进行处理，以提取得到外泌体。本发明的外泌体是脂肪干细胞来源的外泌体，用于皮肤修复时能够加快伤口愈合速度，不仅减少病人的痛苦，也提高伤口恢复质量，减小疤痕面积。对比未处理组伤口愈合的平均时间是33.7天，临床应用含有本发明的外泌体的凝胶制剂后伤口愈合只需12.2天，显著减轻了病人的痛苦和伤口感染几率；即使对于糖尿病这样的难治性创口，其效果也十分显著，有效率达85.7％，而对照组只有42.1％。

技术领域

本发明涉及一种外泌体的制备方法以及由该方法制备的外泌体及其用途，具体而言，涉及一种用于皮肤修复的脂肪干细胞来源外泌体的制备方法以及由该方法制备的外泌体及其用途。

背景技术

外泌体是细胞经过“内吞－融合－外排”等一系列调控过程形成并可分泌的分子直径为40-100nm的亚细胞双层膜囊泡。外泌体在透射电子显微镜下呈扁平状或球状，在蔗糖溶液中的密度为1.13～1.19g/mL，其密度与细胞来源相关，并随蛋白含量而改变。外泌体内不含有DNA片段，但含有与其来源细胞相类似的细胞因子、生长因子等蛋白质，以及脂质、编码或非编码RNA等生物活性物质，在调控细胞生理功能方面具有重要作用。外泌体的质膜含有丰富的胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、脂；外泌体不仅可以保护这些生筏及磷脂酰丝氨酸物活性物质在细胞外环境中不被降解和稀释，也可以促进这些物质通过组织液或血液的远距离输送，同时外泌体膜上特异性的表面配体允许它与受体细胞高效率结合。外泌体在核内体系统中形成，主要过程包括位于细胞膜周围早期核内体的形成以及位于细胞核周围晚期核内体的成熟，后者也称为多泡体；细胞将蛋白质、mRNA和microRNA等物质内吞后形成质膜包裹的内吞小体，内吞小体相互融合形成早期核内体(early endosomes，EEs)；EEs中，质膜内陷包裹胞内液形成囊泡可重新与细胞膜融合，而内吞物质则以出芽方式被选择性地包裹进入核内体的囊泡中；主要过程包括转运必须内吞体分选复合物至EEs的质膜外表面，并通过其泛素化结合位点与EEs中的特异性物质结合，再通过位于结合位点上游的ESCRT-I、ESCRT-Ⅱ的作用向内形成出芽小泡，最后在ESCRT-Ⅲ的剪切作用下与核内体膜分离；晚期核内体(late endosomes，LEs)中含有大量直径为40～100nm的质膜微泡；质膜微泡在LEs与细胞膜融合后被释放进入细胞外环境中，这些被释放进入细胞外环境中的质膜微泡即称为外泌体。最近，第二军医大学附属长海医院整形外科的邢新教授发现脐带间充质干细胞外泌体(exosome)中的microRNA可以通过调控TGFβ/SMAD2通路抑制成肌纤维细胞分化，减小疤痕组织的面积(Fang S,Xu C,Zhang Y,et al.Umbilical Cord-Derived MesenchymalStem Cell-Derived Exosomal MicroRNAs Suppress Myofibroblast Differentiationby Inhibiting the Transforming Growth Factor-β/SMAD2Pathway During WoundHealing.[J].Stem Cells Translational Medicine,2016,5(10):1425.)。但现有技术中，还没有能够将脂肪干细胞来源外泌体应用到皮肤修复中。

发明内容

为解决上述问题，本发明提出了一种外泌体的制备方法以及由该方法制备的外泌体，本发明的外泌体是脂肪干细胞来源的外泌体，用于皮肤修复时能够加快伤口愈合速度，不仅减少病人的痛苦，也提高伤口恢复质量，减小疤痕面积。

根据本发明的一个方面，提供了一种外泌体的制备方法，该方法包括以下步骤：1)采集人脂肪组织，并提取得到脂肪干细胞：2)对步骤1)中得到的脂肪干细胞进行处理，以提取得到外泌体。