[发明专利]微卫星稳定性状态检测的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测微卫星稳定性状态的方法，所述方法包括：

(1)PCR扩增样品中5个准单态性单核苷酸重复位点；

(2)对PCR扩增产物进行毛细管电泳检测；

(3)荧光检测，用基因测序仪检测扩增产物的大小及荧光强度；

(4)数据采集与分析；

其特征在于，所述5个准单态性单核苷酸重复位点为NR-21、BAT-25、BAT-26、NR-24和MONO-27；还包括同步扩增和检测2个多态性五核苷酸重复位点，所述2个多态性五核苷酸重复位点为Penta D和Penta E。

2.根据权利要求1所述检测微卫星稳定性状态的方法，其特征在于NR-21、BAT-25、BAT-26、NR-24和MONO-27的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1-5。

3.根据权利要求1所述检测微卫星稳定性状态的方法，其特征在于5个准单态性单核苷酸重复位点的PCR扩增引物为：SEQ ID NO:8-9、SEQ ID NO:10-11、SEQ ID NO:12-13、SEQID NO:14-15、SEQ ID NO:16-17。

4.根据权利要求1所述检测微卫星稳定性状态的方法，其特征在于所述Penta D和Penta E的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:6-7。

5.根据权利要求4所述检测微卫星稳定性状态的方法，同步扩增Penta D和Penta E的引物对分别为SEQ ID NO:18-19、SEQ ID NO:20-21。

6.根据权利要求1-5所述检测微卫星稳定性状态的方法，其特征在于所述扩增引物分别由三种不同颜色的荧光素标记，三组荧光标记的组合分别为：第一组NR-21、BAT-26、MONO-27；第二组：BAT-25和Penta D；第三组：NR-24和Penta E。

7.根据权利要求6所述检测微卫星稳定性状态的方法，所述三种荧光素标记为FAM、HEX和ROX，优选第一组重复位点的扩增引物以FAM标记、第二组重复位点的扩增引物以HEX标记、第三组重复位点的扩增引物以ROX标记。

8.一种用于进行权利要求1-7所述方法的试剂盒，其特征在于包括以下引物对：SEQ IDNO:8-9、SEQ ID NO:10-11、SEQ ID NO:12-13、SEQ ID NO:14-15、SEQ ID NO:16-17；以及扩增Penta D的引物对SEQ ID NO:18-19、扩展Penta E的引物对SEQ ID NO:20-21，其中上游引物的5’端带有荧光素标记。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于试剂盒中包含引物混合液，所述引物混合液中各引物对浓度如下：SEQ ID NO:8-9为5μM、SEQ ID NO:10-11为3.75μM、SEQ ID NO:12-13为5μM、SEQ ID NO:14-15为25μM、SEQ ID NO:16-17为5μM、SEQ ID NO:18-19为1.25μM、SEQID NO:20-21为10μM。

10.如权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于试剂盒中还包括dNTP、10×Buffer、DNA聚合酶。