[发明专利]一种三价卵黄抗体口服液的制备方法

说明书

本发明公开了一种三价卵黄抗体口服液的制备方法，将初步制备得到的卵黄抗体水溶液进行微孔过滤，依次加入pH6.6的PBS液和硫柳汞，其中卵黄抗体水溶液：PBS液：硫柳汞的体积比为（0.7‑0.9）：（0.04‑0.06）：（0.001‑0.002），混匀，用蜡密封，置于4℃冷藏保存，即得。本发明方法制备的初制卵黄抗体纯度能够达到85%，相较于现有方法，纯度得到了显著的提高；经氯仿‑甲醇体系处理后可以很大程度上保证卵黄抗体的生物活性，对于小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病特异性强，易于市场推广。

技术领域

本发明属于抗体药物领域，特别是涉及一种小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病三价卵黄抗体口服液的制备方法。

背景技术

小鹅瘟由鹅细小病毒引起的雏鹅急性败血性传染病。病雏鹅的临诊特点是精神委顿，食欲废绝，严重下痢，有时出现神经症状，死亡率高。对养鹅业的发展，影响极大，搞好小鹅瘟的防治工作是当务之急，小鹅瘟不仅可以感染鹅，在一定程度上也可感染其他禽类。

番鸭细小由细小病毒引起，是雏番鸭的一种急性传染病。病理变化是纤维素性肠炎、胰脏呈点状坏死，以3周龄内的雏番鸭多发，最早是3日龄发病。患病雏番鸭精神沉郁、厌食、怕冷、软脚、喜蹲、喘气、张口呼吸，喙发绀，显著消瘦。粪便稀薄呈灰白或灰黄色。患病后期角弓反张及腿部瘫痪，病程2～7天。少数病愈雏番鸭大多成为生长不良的僵鸭，出现个体小、消瘦、掉羽等症状；

鸭大舌病是由多种原因引起的一种以鸭鹅舌头长，上下喙短，舌头被长长的露在喙的外面为特征的一种疾病。由于鸭鹅的舌头被长长的伸出并露在喙（嘴）的外面，使鸭鹅无法采食及饮水，鸭鹅常常因无法进食而死亡。发病较轻的鸭只也常因舌头外漏而影响卖相，造成不收此类鸭只或扣除斤称，出栏时屠宰场每只扣2-3元，致使养鸭户蒙受极大的经济损失。

卵黄抗体IgY 是的一种免疫球蛋白Ig，IgY 在功能上相当于哺乳动物IgG，但结构上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空间构象。卵黄抗体具有很多优越性。（1）由于鸟类与哺乳类动物种系发生学的差距，鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄抗体不会激发补体系统，不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应，不与哺乳动物和细菌的Fc受体结合，这在免疫诊断中具有重要意义。（2）卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋白，在贮存、生产、加工、摄食及消化过程中保证其稳定性是非常关键的。多项试验表明，IgY具有较好的稳定性，耐酸、耐碱、耐热。卵黄抗体较易保存，4℃条件下存放5 年或室温条件下存放6 个月对抗体活性无明显影响。（3）卵黄抗体量大，成本低，便于规模化生产。卵黄中抗体浓度能长期维持在相当于甚至超过血清抗体浓度的水平上。总的来讲，卵黄抗体对动物没有毒副作用，用卵黄抗体治疗动物疾病不但避免了血清价格昂贵、产量低的缺点，而且可以避免血清在治疗过程中引起的副作用，是一种很有前途的新型免疫球蛋白制剂。因此，卵黄抗体在禽畜疾病诊断、治疗和预防的应用越来越多。目前卵黄抗体的制备及生产工艺已经成熟，可以保质保量的生产。

发明内容

本发明的目的，在于提供一种小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病三价卵黄抗体口服液的制备方法，该制备方法简单，能够最大程度保留抗体活性，对于小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病特异性。

本发明的技术方案是：

一种三价卵黄抗体口服液的制备方法，步骤如下：

（1）选取无特定病原体蛋鸡在洁净养殖场隔离饲养，对蛋鸡进行3次免疫，每次给每只鸡注射小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病三价疫苗注射剂量分别为（0.6-0.8mL）、（1.0-1.4mL）、（2.2-2.6mL），每次间隔15天；

（2）完成第3次免疫21天后，收集鸡蛋，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:16以上的鸡蛋为小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病病毒高免鸡蛋，收集贮存在16℃条件下备用；