[发明专利]一种用于鉴定弓形虫的LAMP引物组合及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定弓形虫的LAMP引物组合及其应用。本发明提供的LAMP引物组合，由序列1至序列6所示的6种DNA分子组成。所述引物组合可应用于鉴定待测寄生虫是否为弓形虫，可应用于检测待测样本是否感染了弓形虫。本发明提供的引物组合用于鉴定弓形虫，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明具有重大的推广价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于鉴定弓形虫的LAMP引物组合及其应用。

背景技术

弓形虫(Toxoplasma)是一种可感染广泛宿主的寄生原虫。眼弓形虫病是由弓形虫感染所致的一种致盲性眼病，是世界范围内引起免疫健全人群感染性脉络膜炎最重要的原因。弓形虫(Toxoplasma Gondii)也叫三尸虫，是细胞内寄生虫。寄生于细胞内，随血液流动，到达全身各部位，破坏大脑、心脏、眼底，致使人的免疫力下降，患各种疾病。它是专性细胞内寄生虫，属于球虫亚纲、真球虫目、等孢子球虫科、弓形体属。

目前临床针对弓形虫的检测方法主要是涂片镜检和血清学诊断。这些检测方法繁琐，检测时间长，灵敏度低，容易发生漏检和错检，无法满足快速检测的要求。近几年发展起来的分子检测技术，特别是PCR技术，在微生物快速鉴定和检测方面的应用，为寄生虫的快速检测开辟了新的途径。但是，PCR存在检测时间长、易污染、假阳性率高的缺点，使其应用受到限制。

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的核酸扩增技术，其原理是在一种具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下，识别6-8个区域的4-6条引物，在等温条件下快速、特异地扩增目的基因，可推广应用于快速、准确的检测寄生虫。LAMP技术中，引物是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是鉴定弓形虫或检测被弓形虫感染的样本。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了引物组合，可包括引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB。

所述引物F3可为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子。

所述引物B3可为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。

所述引物FIP可为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。

所述引物BIP可为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。

所述引物LF可为如下(a9)或(a10)：

(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；

(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子。

所述引物LB可为如下(a11)或(a12)：