[发明专利]一种检测人类ctDNA基因突变的试剂盒在审
| 申请号： | 201810112801.5 | 申请日： | 2018-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN108179191A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 吴英松;杨学习;朱安娜;许旭平;吴涵韬;刘天才 | 申请（专利权）人： | 广州市达瑞生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/10;C12Q1/6872 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 任重 |
| 地址： | 510665 广东省广州市高*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 多重PCR扩增 基因突变 延伸产物 延伸引物 种检测 引物 检测 电离飞行时间质谱 辅助激光解吸 单碱基延伸 磁珠富集 待测样品 分析数据 扩增产物 突变位点 应用基质 低成本 高通量 飞行 延伸 | ||
1.一组检测人类ctDNA基因突变的引物组，其特征在于，由多重PCR扩增引物和延伸引物组成，多重PCR扩增引物的序列如SEQ ID NO:1～10所示，延伸引物的序列如SEQ ID NO:11～15所示。
2.一种检测人类ctDNA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的检测人类ctDNA基因突变的引物组，引物组由多重PCR扩增引物和延伸引物组成，多重PCR扩增引物的序列如SEQ ID NO:1～10所示，延伸引物的序列如SEQ ID NO:11～15所示。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括高压灭菌纯化水，多重PCR缓冲液，氯化镁缓冲液，dNTP混合物，多重PCR酶，磷酸酶缓冲液，磷酸消化酶，延伸缓冲液，反应催化酶，延伸终止混合液，洗涤液，竞争液，链霉亲和素磁珠。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测体系由PCR扩增反应体系，SAP反应体系，延伸反应体系和富集反应体系组成。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增反应体系的成分组成为：高压灭菌纯化水4.3µL，多重PCR缓冲液2µL，氯化镁缓冲液0.8µL，dNTP混合物0.1µL，多重PCR酶0.8µL，多重PCR扩增引物混合物2µL，待测DNA样品 10µL，共20µL；
PCR扩增反应体系的反应条件如下：95℃ 2minutes；95℃ 30seconds，56℃30seconds，72℃ 1minute，45 cycles；72℃ 5minutes；4℃保存。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述SAP反应体系的成分组成为：PCR扩增反应产物20µL，高压灭菌纯化水3.06µL，磷酸酶缓冲液0.34µL，磷酸消化酶0.6µL；
SAP反应体系的反应条件为37℃反应40 minutes，85℃反应minutes，4℃保存。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述延伸反应体系的成分组成为：SAP反应产物24µL，高压灭菌纯化水1.42µL，延伸缓冲液0.4µL，反应催化酶0.08µL，延伸终止混合液0.1µL，延伸引物混合物2µL；
延伸反应体系的反应条件如下：95℃ 30seconds；95℃ 5seconds，52℃ 5seconds、80℃5seconds、72℃ 3minutes、5个循环，40个循环；4℃保存。
8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述富集反应体系的成分组成为：延伸反应产物28µL，高压灭菌纯化水16µL，洗涤液33.5µL，竞争液41µL，链霉亲和素磁珠4.25µL；
所述富集反应体系的反应条件为：90℃反应5minutes。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广州市达瑞生物技术股份有限公司，未经广州市达瑞生物技术股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810112801.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
